[发明专利]一种尿液中D-泛酸含量的液相色谱串联质谱测定方法

摘要

一种尿液中D‑泛酸含量的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：是将尿液样品经稀释后直接引入液相色谱‑电喷雾电离‑串联质谱仪进行测定，采用外标法定量分析物，可快速、准确检测出尿液中D‑泛酸的含量水平。本发明为全新的尿液中D‑泛酸含量的测定方法，串联质谱法更好的提高了方法的选择性与准确性，D‑泛酸的定量限分别为1.54 ng/mL，方法的回收率范围是87.9‑95.3%，RSD＜13.0%。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了色谱分析的时间，为8 min。

主权项

1.一种尿液中D‑泛酸含量的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：包括以下步骤：a、尿液在室温下解冻，离心以后，然后移取100 µL尿液于10 mL的容量瓶中；b、用0.1%的甲酸水溶液定容，混合均匀，然后移取约 1 mL放入1.8 mL的色谱瓶中，待液相色谱串联质谱进行分析；c、标准工作液配制：用0.1%的甲酸水溶液配制不同浓度的D‑泛酸标准工作溶液,浓度分别为3.6、6、30、60、120、240和360 ng/mL；d、液相色谱‑串联质谱（LC‑MS/MS）测定，吸取上述配制好的不同浓度的标准工作溶液，注入LC‑MS/MS系统，D‑泛酸的线性方程为y=3.84e³x+7.71 e³，其中y代表分析物的峰面积，x表示样品中目标分析物的浓度，相关系数r大于0.9993，对样品待测液进行测定，测得分析物的峰面积，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量；液相色谱条件：采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，规格100 mm × 2. 1 mm，1.8 μm，流动相：溶剂A：0.1%甲酸水溶液，溶剂B：0.1%甲酸乙腈溶液，流动相流速为200 μL/min，梯度洗脱条件：0‑1 min，5%B‑5%B；1‑5 min，5%B‑100%B；5‑6 min，100%B；6‑6.3 min，100%B‑5%B；6.3‑8 min，5%B；分析时间为8 min，进样量为5 μL；串联质谱检测器条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压：5500V, 雾化气：30 psi, 气帘气：40 psi, 辅助加热气：30 psi，射入电压：10 V，驻留时间：100 ms；D‑泛酸所选择的定量离子对分别为220.3→90.1和220.3→184.3。