[发明专利]一种鳜传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 201610710027.9 | 申请日： | 2016-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN106399584B | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 李宁求;付小哲;张醴溪;林强;刘礼辉;梁红茹;黄志斌 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 胡辉<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 510380 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒灭活快速检测试剂盒和检测方法。该检测试剂盒和检测方法是通过对病毒mRNA的检测来监测ISKNV是否灭活，具体步骤是将灭活疫苗半成品或成品接种CPB细胞后7天，提取细胞总RNA，去除DNA残留，进行反转录，然后用针对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ORF099 基因保守区序列设计特异引物和探针进行荧光定量PCR反应，根据反应结果判定病毒是否灭活完全。本发明可对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒灭活进行快速检测，可以简化ISKNV细胞灭活疫苗灭活检验操作程序、缩短检验周期、节约成本，提高了灭活检验灵敏度，提高疫苗生产效率。 | ||
| 搜索关键词： | 灭活 鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 灭活疫苗 细胞 检测 检验 荧光定量PCR反应 基因保守区序列 快速检测试剂盒 病毒mRNA 操作程序 反应结果 检测试剂 快速检测 特异引物 疫苗生产 反转录 灵敏度 总RNA 探针 去除 半成品 接种 判定 病毒 监测 节约 | ||
【主权项】：
1.一种传染性脾肾坏死病毒灭活快速检测试剂盒，包括如下组分：针对鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的特异性引物及探针、反转录酶、Taq酶、反转录反应液、荧光定量反应液；其特征在于，所述针对鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的特异性引物及探针是根据鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ORF099基因mRNA保守区序列设计的，所述特异性引物及探针的序列如下所示：/n反转录引物：/nORF099-F:5’-ACTTGGCTTCCACACAATCC-3’；/nORF099-R:5’-ATGCTGTGCTGTCATCTTGC-3’；/n探针ORF099-P:5’FAM+ATTGGCATCCAAGCCAATATACATGGC+TAMARA 3’，探针的两端链接发光基团和猝灭基团。/n
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