[发明专利]一种豇豆叶片DNA的高盐乙醇提取方法

摘要

本发明提供一种豇豆叶片DNA高盐乙醇提取方法，包括如下步骤：(1)采用DNA提取液裂解液氮研磨好的豇豆叶片，于60℃水浴60min；(2)取混合溶液离心，取上清液，加入CTAB沉淀缓冲液进行沉淀；(3)沉淀反应后离心，弃掉上清液，取沉淀物，向其中加入高盐TE缓冲液，于42℃水浴15min；(4)加入无水乙醇进行沉淀，离心，弃上清液，用80％的乙醇溶液清洗沉淀物；(5)沉淀物离心，弃上清液，剩余物干燥后加入TE溶液，42℃水浴20‑30min，离心，取2/3上清液，4℃冰箱保存。本发明的方法使用安全、成本低廉，不使用毒性强的有机试剂，DNA提取效率高，整个提取过程可以3小时内完成，提取到的豇豆叶片DNA含量高，质量好，可用于酶切以及下游的PCR扩增。

主权项

1.一种豇豆叶片DNA的高盐乙醇提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取豇豆新鲜叶片经磨碎后置于无菌容器中，加入DNA提取液进行裂解，于60℃水浴60min；所述DNA提取液为：100mM tris，20mM EDTA，1.4M NaCl，2％CTAB，1％PVP，pH为8.0；所述豇豆叶片与DNA提取液的m/v比为1:4mg/μL；(2)取水浴后的混合溶液于常温下10000g离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的CTAB沉淀缓冲液进行沉淀反应5min；所述CTAB沉淀缓冲液为：1％CTAB，50mM tris，10mM EDTA，20％无水乙醇，pH为8.0；(3)沉淀反应完全后于常温下10000g离心2～5min，弃掉上清液，取沉淀物，向其中加入400μL高盐TE缓冲液，于42℃水浴15min；所述高盐TE缓冲液为：10mM tris，1mM EDTA，1M NaCl，pH为8.0；(4)向步骤(3)所得物中加入800μL无水乙醇进行沉淀5min，然后于常温下10000g离心2～5min，弃上清液，用80％的乙醇溶液清洗沉淀物；(5)将步骤(4)所得物于常温下10000g离心2～5min，弃上清液，将离心管倒扣在干净滤纸上干燥10min，加入120μLTE溶液，所述TE溶液为：10mM tris，1mM EDTA；42℃水浴20‑30min，于常温下10000g离心2～5min，取80μL上清液，4℃冰箱保存。