[发明专利]可注射性软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种可注射性软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶及其制备方法。本发明将同种或异种软骨经过脱细胞处理制备软骨细胞外基质，同时将同种或异种骨组织经过脱脂、脱钙、脱细胞处理制备脱钙骨基质，二者按照一定比例混合后再经过胃蛋白酶消化，在中性pH、37℃和适宜盐浓度条件下固化成可注射性水凝胶。使用本发明所述方法制备的软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶具有良好的生物可降解性，最重要的是具有可注射性；同时，由于进行脱细胞处理，免疫原性大大降低，具有较好的生物相容性，生物排斥反应降低；本发明取材简单，操作方便，可用于各种软骨缺损填充及微创骨科软骨修复治疗，具有良好的临床应用前景。

主权项

1.一种可注射性软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶的制备方法，所述水凝胶是由同种或异种软骨经过脱细胞处理，同种或异种骨组织经过脱脂、脱钙、脱细胞处理，二者按照一定比例混合后所形成的在HCl溶液下溶解，在37℃、中性PH值和适宜盐浓度的条件下固化成具有一定粘性且含有成骨活性因子的骨胶原水凝胶；其特征在于：包括以下步骤：a制备软骨脱细胞外基质冻干海绵①用含苯甲基磺酰氟的Tris‑HCl缓冲液浸泡同种或异种软骨块，并将软骨粉碎，蒸馏水反复冲洗；②加入含Triton X‑100和苯甲基磺酰氟的Tris‑HCl缓冲液震荡12～24h；③超纯水反复冲洗、沥干；④加入DNase I与RNase A震荡消化12～24h，超纯水反复冲洗；⑤冷冻干燥；b制备含脱钙骨基质冻干海绵①用含苯甲基磺酰氟的Tris‑HCl缓冲液浸泡同种或异种骨组织，并将骨组织粉碎，蒸馏水反复冲洗；②用氯仿和甲醇进行脱脂12～72h，蒸馏水反复冲洗；③用HCl溶液进行脱钙12～72h，蒸馏水反复冲洗；④加入CaCl₂溶液搅拌1～3h，蒸馏水反复冲洗；加入EDTA溶液搅拌1～3h，蒸馏水反复冲洗；加入LiCl溶液搅拌1～3h，蒸馏水反复冲洗；⑤加入含Triton X‑100和苯甲基磺酰氟的Tris‑HCl缓冲液震荡12～24h；⑥超纯水反复冲洗、沥干；⑦加入DNase I与RNase A震荡消化12～24h，超纯水反复冲洗；⑧冷冻干燥；c软骨细胞外基质混合含脱钙骨基质水凝胶的制备①按照一定比例混合步骤a和步骤b中获得的冻干软骨细胞外基质和冻干骨基质，用HCl溶液溶解并加入胃蛋白酶，搅拌12～96h；②溶液pH调至中性，加入10×PBS和1×PBS混匀；③37℃条件下放置20～60分钟固化成水凝胶。