[发明专利]一种建立泰山黄精高频再生体系的方法及培养基

摘要

本发明针对当前泰山黄精生产中用种子繁殖困难，常规根茎繁殖易出现病虫害加重和种质退化，而组培主要以根茎顶芽和茎尖为外植体建立快繁体系，外植体来源单一、试验材料消耗量大、繁殖效率低的现状，选择以比较易得的黄精顶芽芽鳞为外植体试材，通过诱导芽鳞分化获得不定根，再对不定根进一步诱导产生同时具有不定根和顶芽的根茎、不定芽团和多种形态的愈伤组织等不同类型的分化体；对这些类型的分化体分别继续培养，均可继续产生新的不定芽团、具顶芽根茎和多种类型愈伤组织，从而建立泰山黄精离体根、茎、叶的高频再生体系；采用同样的培养基也可获得根茎的高频再生体系。利用以上方法获得的根、茎、叶、愈伤组织及根茎之间在不同培养时期可相互转化生长。

主权项

1.一种建立泰山黄精高频再生体系的方法，其特征在于包含有如下步骤：（1）外植体的选择 选择泰山黄精根茎顶芽外层包被的芽鳞作为外植体；（2）无菌外植体的筛选 将外植体用无菌水冲洗，再用无菌滤纸吸干表面多余水分，置于无菌空瓶内，在无菌室超净工作台上进行表面消毒，消毒完后，无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干表面多余水分，接种于诱导分化培养基上，每瓶1片，放置在无菌室暗培养；培养3-9 d后挑选并弃除真菌或细菌污染的外植体，将获得的无菌外植体作为试验材料在诱导分化培养基中继续培养；从第7 d开始，外植体开始出现明显生长变化；（3）外植体再生分化诱导 外植体在诱导分化培养基上培养14 d后，芽鳞基部开始长出白色不定根，随着培养时间延长，不定根表面覆盖白色绒毛，20-30 d后，新生的白色不定根变成条状、片状或束状，并不断伸长至2-4 cm；（4）离体根茎叶的再生诱导A、离体根诱导 将外植体诱导分化产生的不定根切下，接种在分化启动培养基上，继续培养20-30 d后，在根束基部、距新根的根尖生长点1-1.5 cm处均开始长出浅黄色半透明状颗粒突起，并逐渐长成白色不定芽，将这些不定芽与根束共同体继续在分化培养基上培养，继续培养30 d后，这些不定芽形成直径2-3 cm的不定芽芽团，每个不定芽芽团有15-23个不同类型的不定芽苗；不定芽苗的类型主要有以下几种：a具有根和顶芽的圆球状根茎；b无根的白色不定芽；c无根，具黄绿色茎叶的小苗；B、离体叶诱导 从不定根诱导获得的不定芽芽团上，选择生长健壮、绿色、叶片宽度大于0.3 cm的完整叶片，单独剪下平铺在分化启动培养基表面，7 d后叶片开始膨大卷翘，14d后，在叶片基部长出白色颗粒状愈伤或直接长出白色不定芽；C、离体茎诱导 剪取不定根诱导获得的不定芽芽团中高度0.5 cm以上、至少具有1个节的茎段，直接插入或平铺在分化启动培养基上，14 d后，在茎段剪口处形成一圈白色丛生芽，每段茎段产生9- 20个不定芽，25 d后逐渐长成直径1-3 cm的丛生芽芽团，将这样的芽团切分成直径0.5-1 cm的小芽团进行继代增殖培养；（5）增殖继代培养将上一步骤中分化的各种器官类型离体根茎叶诱导产生的不定芽和各种类型的分化体在分化继代培养基上进行继代增殖培养，每隔15-20 d继代一次，最后得到泰山黄精高频再生体系。