[发明专利]高效液相色谱-串联四级杆质谱联用同步测定气溶胶中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法

摘要

一种高效液相色谱‑串联四级杆质谱联用同步测定气溶胶中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，包括：用超纯水对气溶胶样品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖进行超声萃取，用高效液相色谱‑串联四级杆质谱联用仪进行检测：采用氨水作为流动相；质谱部分的离子源采用适宜极性分子分析的电喷雾电离方式，质谱方法采用多次优化后的离子源参数和化合物参数，在负离子和多反应监测模式下进行定性和定量分析。通过外标曲线法，L、M、G在0.01‑1μg/ml范围内线性关系良好，相关系数超过0.99，其中L的检出限小于0.005μg/ml，M和G均小于0.01μg/ml，实验重复性很好，L、M、G的重复性实验的相对标准偏差分别为1.31％，4.48％和1.31％，其加标回收率均达到97％以上。

主权项

1.一种高效液相色谱‑串联四级杆质谱联用同步测定气溶胶中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于：步骤包括：（1）用超纯水对气溶胶样品中的三种单糖左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖进行超声萃取，所得萃取液过滤后完成样品的前处理；（2）用高效液相色谱‑串联四级杆质谱联用测定样品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖：采用恒流速洗脱，流速为0.2‑0.5 ml /min；（3）将步骤（1）所得的经过萃取的样品进样后，在步骤（2）中流动相的带动下进入柱温箱中的色谱柱中，柱温箱温度设定不超过柱子最高耐温度；三种单糖在流动相的带动下于色谱柱内洗脱分离后，各组分通过接口进入质谱检测；质谱的离子源采用电喷雾电离方式获得的气相离子进入质量分析器；（4）进入质量分析器后，采用质谱多反应监测分析方法，即选择多个母、子离子对同时进行检测，设定只有质荷比为160.9的母离子能通过一级质谱进入碰撞室，设定在碰撞室被打碎的碎片子离子中101.0,113.0和129.0能通过二级质谱并被最后的检测器检测；相同的母、子离子对的化合物参数相同；（5）结合目标物的保留时间和特征子离子对左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖进行定性，用丰度最高的160.9‑101.0离子对对三种目标物进行定量，定量方法采用外标曲线法；步骤还包括：每两周用200mM的NaOH溶液冲洗柱子24小时，冲洗流速设定为0.4 ml min‑1，冲洗液不进入质谱，冲洗完后接着用质量分数为0.001%的氨水以0.4 ml min‑1的流速冲洗2小时以去除柱内残留的NaOH溶液，冲洗液不进入质谱；步骤（2）中的色谱柱选择为Dionex 4mm×250mm的CarboPac MA1 分析柱以及4mm×50mm的CarboPac MA1 保护柱；流动相为双流动相，即质量分数0.001%的氨水以及超纯水，氨水与超纯水的体积比为10:90；步骤（3）中离子源的离子喷雾电压设定为‑3800V，雾化气设定为38 psi，雾化温度设定为650°C，辅助加热气设定为80 psi，气帘气设定为46 psi；柱温箱温度为45°C；步骤（4）各母、子离子对的化合物参数为：左旋葡聚糖：母离子为160.9，子离子为101.0 或113.0，去簇电压为‑45或‑42，入口电压为‑2.2或‑2.0，碰撞室入口电压为‑9或‑6，碰撞能为‑15或‑13，碰撞室出口电压为‑1.7或‑2.2；半乳聚糖：母离子为160.9，子离子为101.0 或129.0，去簇电压为‑45或‑38，入口电压为‑2.2或‑3.2，碰撞室入口电压为‑9或‑6，碰撞能为‑15或‑13，碰撞室出口电压为‑1.7或‑2.2；甘露聚糖：母离子为160.9，子离子为101.0 或113.0，去簇电压为‑45或‑42，入口电压为‑2.2或‑2.0，碰撞室入口电压为‑9或‑6，碰撞能为‑15或‑13，碰撞室出口电压为‑1.7或‑2.2.。