[发明专利]一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法

摘要

本发明涉及一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法,属于植物组织培养快速繁殖技术领域。包括以下依序进行的步骤:（1）无菌外植体的获取;（2）诱导外植体脱分化形成愈伤组织;（3）诱导愈伤组织再分化形成不定芽;（4）不定芽的继代培养；（5）生根培养；（6）小苗炼苗移栽。利用本发明所述方法，外植体的脱分化率在99%以上，愈伤组织的再分化率在35%以上，污染率极少，获得的都是可以用于种植的合格健壮组培苗，移栽成活率在98%以上。

主权项

1.一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法，包括：(1)无菌外植体的获取：选择芥菜型油菜成实饱满的种子，在超净工作台上灭菌，将灭菌后的种子播种到种子萌发培养基；播种后，暗培养；然后将伸长的下胚轴在无菌的条件下切成7mm‑12mm的小段外植体；所述的种子萌发培养基为：MS培养基+琼脂粉6.0～8.0g/L，pH值为5.8～6.0；(2)诱导外植体脱分化形成愈伤组织：在无菌的条件下，将切好的外植体放入愈伤诱导培养基中，诱导外植体形成愈伤组织；愈伤诱导培养基的配方为：MS培养基+蔗糖28～32g/L+甘露醇16～20g/L+2,4‑D 0.8～1.2mg/L+Kinetin 0.25～0.35mg/L+琼脂粉6g/L，pH值为5.8～6.0；(3)诱导愈伤组织再分化形成不定芽点：在无菌的条件下，将步骤(2)中所获得的愈伤组织插入不定芽点诱导培养基中，诱导愈伤组织形成不定芽点；不定芽点诱导培养基的配方为：MS培养基+蔗糖28～32g/L+TDZ1.2～1.8g/L+NAA 0.08～1.2g/L+硝酸银4.8～5.2mg/L+琼脂粉7.0～7.4g/L，pH值为5.8～6.0；(4)不定芽的生长培养：在无菌条件下，将步骤(3)中获得的带有不定芽点的愈伤组织转移到不定芽生长培养基中，进行不定芽的生长培养；不定芽生长培养基的配方为：MS培养基+葡萄糖8.0～12g/L+木糖0.23～0.27g/L+MES 0.5～0.7g/L+反式‑Zeatin 1.8～2.2mg/L+IAA 0.08～0.12mg/L+琼脂粉5.8～6.2g/L，pH值为5.8～6.0；(5)生根培养：在无菌条件下，将步骤(4)获得的不定芽切割成单株，接种到生根培养基上进行生根培养；生根培养基的配方为：MS培养基+蔗糖8～12g/L+琼脂粉8～12g/L，pH值为5.8～6.0；(6)增殖培养：接种到生根培养基上的不定芽长成具有多个侧枝生长点的完整植株，将该植株切成2‑3段带有侧枝生长点的茎段后，接种到增殖培养基中进行增殖培养，扩繁植株；两周继代一次；所述的增殖培养基的配方与生根培养基相同；(7)小苗炼苗移栽：将步骤(6)中获得的已生根的小苗进行炼苗，然后按常规技术移栽到大田或温室里。