[发明专利]多种转基因元件同时快速检测的方法

摘要

本发明提供了一种多种转基因元件同时快速检测的方法，包括如下步骤：步骤1、多壁碳纳米管/氧化石墨烯纳米带MWCNTs/GONRs分散液的制备；步骤2、绿色碲化镉量子点溶液和红色碲化镉量子点溶液的制备；步骤3、碲化镉量子点‑捕获探针分散液的制备；步骤4、荧光共振能量转移传感体系的构建；步骤5、标准曲线的构建；步骤6、基于荧光共振能量转移传感体系对转基因大豆的检测。该传感器的制备是基于DNA互补配对杂交特异性作用所构建的，因而相对于免疫反应而言有与目标分子结合力强、特异性高、长时间暴露不容易变性、对周围环境要求不高等特点。

主权项

1.多种转基因元件同时快速检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、多壁碳纳米管/氧化石墨烯纳米带MWCNTs/GONRs分散液的制备：称取120 mg 多壁碳纳米管加入圆底烧瓶中，向烧瓶中加入40 mL 9:1的H2SO4/H3PO4并搅拌，然后向上述混合溶液中加入600 mg KMnO4，并在65℃油浴下继续搅拌2 h；将反应后溶液冷却至室温，将其倒入400 mL含0.375% H2O2的冰水中，溶液经孔径0.2 μm的 PTFE膜过滤得到固体产物MWCNTs/GONRs，并继续水洗数次；步骤2、绿色碲化镉量子点溶液和红色碲化镉量子点溶液的制备；步骤3、碲化镉量子点‑捕获探针分散液的制备：取步骤2制备的绿色碲化镉量子点溶液和红色碲化镉量子点溶液超声分散，采用HCl调节绿色碲化镉量子点溶液的pH值，得到混合液A；采用HCl调节红色碲化镉量子点溶液的pH值，得到混合液B；向混合液A中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入终止子的探针，在室温下反应，得到绿色碲化镉量子点‑捕获探针，记作NP‑gQDs；向混合液B中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，振荡均匀，加入N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，振荡均匀，加入启动子的探针；在室温下反应，得到红色碲化镉量子点‑捕获探针，记作PP‑rQDs；之后用乙醇洗涤，离心，最后将NP‑gQDs和PP‑rQDs分别分散于Tris‑HCl缓冲液中，分别得到NP‑gQDs分散液和PP‑rQDs分散液，备用；步骤4、荧光共振能量转移传感体系的构建：将MWCNTs/GONRs分散液与NP‑gQDs溶液和PP‑rQDs溶液混合，超声分散，得到混合液，静置后，测定其荧光强度；步骤5、标准曲线的构建：将不同浓度的终止子NOS溶液和启动子P35s溶液加入到步骤4所得的混合液中，超声，静置后，测量其荧光恢复程度，构建标准曲线；步骤6、基于荧光共振能量转移传感体系对转基因大豆的检测：采用植物DNA提取试剂盒提取转基因大豆的DNA溶液，之后将转基因大豆的DNA加入到步骤4构建的荧光共振能量转移传感体系中，测定其荧光恢复强度与标准曲线进行对比，得出是否含有NOS和P35s的结论；所用的DNA序列如下：启动子P35s：GGCAGAGGCATCTTCAACGATGGCC，终止子NOS：GATTAGAGTCCCGCAATTATACATT，启动子的探针：H2N‑GGCCATCGTTGAAGATGCCTCTGCC，终止子的探针：H2N‑AATGATTAATTGCGGGACTCTAATC。