[发明专利]一种基于ZNA引物的STR分型试剂盒

摘要

本发明属于法医DNA检验分析领域，具体涉及一种用于微量降解生物样本的miniSTR分型试剂盒。该试剂盒采用ZNA引物替代传统的DNA引物，同时复合扩增12个miniSTR基因座和一个性别识别基因座：D20S1082、D6S474、D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3S4529、D2S441、D4S2364、D3S3053、D17S1301、D21S11和Amelogenin。本发明、将miniSTR分型技术和ZNA引物扩增相结合，提供的STR分型试剂盒适合于中国人群，且适用于少数民族人群，适用于微量以及高度降解生物样本，分型的灵敏度和精确性大大提高。

主权项

1.一种miniSTR分型试剂盒，其特征在于：所述的miniSTR分型试剂盒包括用于扩增12 个miniSTR基因座的12对ZNA引物，所述的12个miniSTR基因座为：D20S1082、D6S474、 D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3S4529、D2S441、D4S2364、D3S3053、D17S1301和 D21S11；所述的miniSTR分型试剂盒还包括用于扩增性别识别基因座Amelogenin的1对ZNA引物；所述的miniSTR分型试剂盒同时复合扩增所述的12个miniSTR基因座和性别识别基因座Amelogenin；所述的用于扩增12个miniSTR 基因座的12对ZNA引物为：用于扩增D20S1082的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：1所示的核酸序列从5’端起的第9和15个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：2所示的核酸序列从5'端起的第5,11和15个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D6S474的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：3所示的核酸序列从5’端起的第5和21个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：4所示的核酸序列从5’端起的第10和23个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D12ATA63的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：5所示的核酸序列从5’端起的第4,10和16个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：6所示的核酸序列从5’端起的第5,13和20个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D9S1122的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：7所示的核酸序列从5’端起的第7和22个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：8所示的核酸序列从5’端起的第5,11和21个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D2S1776的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：9所示的核酸序列从5’端起的第4,8,12和20个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：10所示的核酸序列从5’端起的第6,10,15和20个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D1S1627的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：11所示的核酸序列从5’端起的第5,14,20和25个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：12所示的核酸序列从5’端起的第6,15和20个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D3S4529的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：13所示的核酸序列从5’端起的第6,13和18个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：14所示的核酸序列从5’端起的第6,13和21个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D2S441的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：15所示的核酸序列从5’端起的第5,11和19个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：16所示的核酸序列从5’端起的第5,9和15个核苷酸中的2个或3个上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D4S2364的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：17所示的核酸序列从5’端起的第5和19个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：18所示的核酸序列从5’端起的第7,12和18个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D3S3053的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：19所示的核酸序列从5’端起的第7,14和22个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：20所示的核酸序列从5’端起的第7和20个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D17S1301的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：21所示的核酸序列从5’端起的第6和15个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：22所示的核酸序列从5’端起的第4,9,16和24个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；用于扩增D21S11的一对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：23所示的核酸序列从5’端起的第3,6和15个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：24所示的核酸序列从5’端起的第4,11和23个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；所述的用于扩增性别识别基因座Amelogenin的1对ZNA引物为：正向引物：SEQ ID NO：25所示的核酸序列从5’端起的第3和15个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；反向引物：SEQ ID N0：26所示的核酸序列从5’端起的第5和16个核苷酸上偶联Z unit构成的ZNA序列；所述的miniSTR分型试剂盒中，用于扩增12个miniSTR基因座以及Amelogenin基因座的ZNA引物分别由四种荧光素标记，相同荧光素标记视为同一组，第一组为：D20S1082、D6S474和D12ATA63，第二组为： Amelogenin、D9S1122和D2S1776，第三组为：D1S1627、D3S4529和D2S441，第四组为： D4S2364、D3S3053、D17S1301和D21S11。