[发明专利]8‑羟基脱氧鸟苷作为尿液标志物的应用

摘要

本发明提供8‑羟基脱氧鸟苷作为尿液检测标志物的应用，所述的8‑羟基脱氧鸟苷的分子式C10H13O5N5。本发明在检测中，其标本的采集具有无创性，获取容易，获取量多等优点，且相较于FOBT试验更易被检测者接受，可减少工作人员的精神负担，让普通大众更易接受，利用优化的离线固相萃取术联合超高效液相色谱串联质谱的方法来精确定量被测试者尿液中的DNA氧化损伤标志物8‑羟基脱氧鸟苷浓度，通过建立的结直肠癌发病预测模型对被测试者进行发病风险分析。采用本发明的尿液标志物进行筛查结直肠癌具有无创、快速、高通量等特点，检测方法不仅适用于结直肠癌早期的检测，也可用于结直癌转移非转移的检测，具有良好的应用前景。

主权项

一种8‑羟基脱氧鸟苷作为尿液检测标志物的应用，所述的8‑羟基脱氧鸟苷的分子式：C10H13O5N5，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)样品经固相萃取预处理：将待测的尿液样本保存于‑80℃冰箱中，应用前取出于4℃下解冻，离心后取上清液加水稀释，并加入10pmol同位素内标[15N5]8‑OHdG，作固相萃取，向HLB Oasis柱子中加入甲醇进行活化，再加入水进行平衡，再加入尿液样本，随后用5％甲醇进行清洗，最后用50％甲醇进行洗脱，收集洗脱液并用真空离心机干燥，随后加水复溶待测；(2)经固相萃取处理后的尿液利用液相色谱进行分离，所用的色谱条件是：色谱柱为Waters BEH C18柱，1.7μm,2.1×100mm，柱温为40℃，流动相为0.1％乙酸水溶液‑甲醇，92.5:7.5,V/V，流速为0.25mL/min，上样量为5微升，随后将分离后的目标物引入质谱中进行定量检测；(3)用质谱进行目标物的定量，所述质谱扫描方式为多反应监测，所述的质谱检测相关参数，离子源温度设定为550℃，喷雾电压设定为5.5kv，离子源气体1为60psi，离子源气体2为40psi，气帘气为35psi，8‑羟基脱氧鸟苷的定量离子对为m/z 284.1>168.0,定性离子对为m/z 284.1>117.0,同位素内标[15N5]8‑OHdG的定量离子对m/z 289.1>173.0，碰撞能量分别为18V，22V和18V，解簇电压为45V；驻留时间为150ms，通过配制标准品，绘制标准曲线，通过测得的质谱峰面积来计算尿液中8‑羟基脱氧鸟苷浓度。