[发明专利]一种检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法

摘要

本发明目的在于提供一种检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法，包括以下步骤：（1）分别取待测单质糖的标准品且配制成一系列浓度梯度的标准溶液；（2）HPLC‑RID标准曲线的建立：将步骤（1）所配制的标准溶液分别进样于HPLC‑RID系统进行检测，根据峰面积与标准溶液浓度的对应关系分别建立标准曲线；（3）金霉素发酵液的预处理：取适量金霉素发酵液，加入与所取金霉素发酵液等体积量的乙腈，摇匀，过滤取滤液作为样品；（4）金霉素发酵液的HPLC‑RID测定：将步骤（3）所得样品按照步骤（2）的方法进行测定再通过计算得出金霉素发酵液中待测单质糖的浓度。本发明能准确地检测金霉素发酵液中的12种单质糖并准确定量，对实际生产过程能精细地提供指导发酵的数据。 1

主权项

1.一种检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）标准溶液的配制：分别取待测单质糖的标准品且配制成一系列浓度梯度的标准溶液；

（2）HPLC‑RID标准曲线的建立：将步骤（1）所配制的标准溶液分别进样于HPLC‑RID系统进行检测，设定检测条件，根据峰面积与标准溶液浓度的对应关系分别建立标准曲线；

（3）金霉素发酵液的预处理：取适量金霉素发酵液，加入与所取金霉素发酵液等体积量的乙腈，摇匀，过滤取滤液作为样品；

（4）金霉素发酵液的HPLC‑RID测定：将步骤（3）所得样品按照步骤（2）的方法进行测定，分别通过峰面积及标准曲线计算出样品中待测单质糖的浓度，再通过样品中待测单质糖的浓度及样品体积计算出金霉素发酵液中待测单质糖的浓度；

所述待测单质糖包括果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、鼠李糖、异麦芽糖、麦芽糖、麦芽三糖、蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖；

所述步骤（1）中标准溶液的浓度梯度范围为0~2000 μg/mL；

所述步骤（2）中的检测条件如下：色谱柱：糖柱，3.5μm 4.6mm × 250mm；柱温：50℃；流动相：乙腈和氨水的体积比为3:1的混合溶剂；流速：0.5mL/min；进样量：10μL。

2.根据权利要求1所述的检测金霉素发酵液中单质糖浓度的方法，其特征在于，所述步骤（3）中过滤采用0.45μm的滤膜。