[发明专利]一种培育镉低积累籼稻品种的方法

摘要

本发明公开了一种培育镉低积累籼稻品种的方法，包括：克隆籼稻受体材料的OsNramp5的部分CDS序列；利用CRISPR/Cas9系统，根据外显子序列选择靶标序列，构建pCRISPR/Cas9重组载体；将pCRISPR/Cas9重组载体导入水稻愈伤组织中得到转基因苗；筛选转基因阳性植株；获得突变植株；将突变植株进行繁种，于后代植株中分离不含转基因成分的功能缺失突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术定向敲除籼稻镉吸收主效基因OsNramp5，定向育成不带转基因成分，综合农艺性状无显著变异且稻米镉含量低的籼稻材料，具有靶向高效、育种周期短、成本低、实用性强等优势。

主权项

1.一种培育镉低积累籼稻品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、扩增籼稻受体材料的OsNramp5的部分CDS序列并测序；S2、利用CRISPR/Cas9系统，根据OsNramp5的部分CDS序列选择靶标序列；靶标序列的反向互补链具有5’‑(N)X‑NGG‑3’结构，所述N表示A，T，C和G中的任意一个，所述X为19或20；所述靶标序列包括TPS1和TPS2，所述TPS1的DNA序列为SEQ IDNO.2所示的序列，所述TPS2的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的序列；S3、构建含所述靶标序列片段的pCRISPR/Cas9重组载体；S4、将所获得的pCRISPR/Cas9重组载体导入水稻愈伤组织中得到转基因苗；S5、筛选所述转基因苗中的转基因阳性植株；S6、对所述转基因阳性植株的靶位点测序，筛选突变植株；S7、将所述突变植株进行繁种，于后代T1代植株中分离不含转基因成分的功能缺失突变体。