[发明专利]一种重组猪IL‑2成品冻干制剂的制备方法在审
| 申请号： | 201610726309.8 | 申请日： | 2016-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN106362140A | 公开（公告）日： | 2017-02-01 |
| 发明（设计）人： | 王明丽;赵俊;赵雨;戚仕梅;高耀辉;汪良青;周炜;王利利;符修乐;李树启;赖鹏飞;马腾飞 | 申请（专利权）人： | 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 |
| 主分类号： | A61K38/20 | 分类号： | A61K38/20;A61K9/19;C12P21/02;C07K14/55;C07K1/22;C07K1/18;A61P37/04;A61K47/26;A61K47/10;A61K39/39;A61K39/135;A61K39/215;A61K39/12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组猪IL‑2成品冻干制剂的制备方法。以重组猪IL‑2的BL21/pET‑32a‑rPoIL‑2工程菌基础种子批冻干菌种为原料制备得到重组猪IL‑2成品冻干制剂，本发明制备的重组猪IL‑2为冻干型，IL‑2含量≥1×106单位/瓶，2～8℃可长期保存，在低于25℃室温下可保存两年。本发明与现有技术相比，所建立的重组猪IL‑2是在大肠埃希工程菌菌体破碎后在上清液中表达的目的蛋白，免去了由包涵体形式表达蛋白所需要的变性和复性过程，同时对每一步的制备及生产过程建立了详细的技术参数以及相应的质量控制体系，为重组猪IL‑2产业化奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 il 成品 制剂 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种重组猪IL‑2成品冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)以重组猪IL‑2的BL21/pET‑32a‑rPoIL‑2工程菌基础种子批冻干菌种为原料，培养后得到一级生产种子，所述BL21/pET‑32a‑rPoIL‑2工程菌的基因序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示；(2)将一级生产种子再次培养至OD值为0.6～1.2，制得二级种子菌液；(3)二级种子菌液经发酵、诱导表达后，离心，得到湿菌体；(4)湿菌体破碎，离心收集上清液，即得粗制重组猪IL‑2；(5)粗制重组猪IL‑2先后经亲和层析纯化和离子交换层析纯化后，即可得到纯化后的重组猪IL‑2；(6)纯化后的重组猪IL‑2中加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，即可得到重组猪IL‑2成品冻干制剂。
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