[发明专利]一种从苜蓿中提取冰结构蛋白的方法

摘要

一种从苜蓿中提取冰结构蛋白的方法，涉及一种从苜蓿中提取冰结构蛋白的方法。本发明为了解决现有技术中冰结构蛋白提取原料有限，提取工艺复杂，成本较高、提取得到的冰结构蛋白不能在冷冻食品与医学上广泛应用的问题。提取方法：一、取苜蓿干草叶，粉碎过筛；二、制备直径2cm冰球；三、苜蓿草粉与磷酸盐缓冲溶液混合、离心；四、冰球加入上清液提取；五、冰结构蛋白的复提。本发明方法提取浓度高，杂质少，节约成本时间，可直接进行SDS‑PAGE测定其分子量，不需冷诱导，原材料方便易得，成本低，并且提取工艺简单可以在冷冻食品中普遍应用。本发明适用于从苜蓿中提取冰结构蛋白。

主权项

一种从苜蓿中提取冰结构蛋白的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、苜蓿干草处理取苜蓿干草，并除掉苜蓿干草中的杂质与灰尘，弃去草茎，保留苜蓿干草叶，粉碎后过80目筛备用；二、冰球的制备在硅胶冰格的每个冰孔位置放置直径为1cm的玻璃球，向冰孔注蒸馏水，然后置于‑18℃的冰箱中冷冻，得到直径为2cm的冰球；三、上清液制备按料液比为1g:(5～30mL)将步骤一制备的苜蓿草粉与磷酸盐缓冲溶液混合得到混合液，将得到的混合液置于室温下，进行搅拌提取0.5～3.0h，然后将提取后的混合液置于离心机中，在离心机中离心14～16min得到上清液；四、将步骤二制备的冰球加入上清液中至最上层冰球的上表面与上清液液面相平，然后置于‑18℃冰箱中，提取2～5min，此时冰球吸附ISPs达到饱和，滤出冰球，冰球融化后得到冰结构蛋白溶液，滤出冰球后得到剩余的上清液；五、冰结构蛋白的复提向剩余的上清液中加入步骤二制备的冰球，重复步骤四2～4次，收集每次提取得到的冰结构蛋白溶液，即完成。