[发明专利]一种高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌筛选方法

摘要

本发明公开了一种高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌筛选方法，包括如下步骤，从腌菜中筛选出的芽孢杆菌，点种于抗原蛋白筛选平板表面，培养24小时，根据抗原蛋白筛选平板的水解圈大小及菌株直径比选择用于豆粕抗原蛋白降解的菌株；所述的抗原蛋白筛选平板采用双层培养基铺板，上层培养基为营养培养基，下层培养基为选择性培养基，其中下层培养基的制备过程主要采用等电点沉降法，从豆粕浸出液中沉降出抗原蛋白大球蛋白沉淀和β‑伴球蛋白，溶于ddH2O得到抗原蛋白水溶液后，加入琼脂后铺板。

主权项

一种降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌筛选方法，其特征在于，包括如下步骤，从腌菜中筛选出的芽孢杆菌，点种于抗原蛋白筛选平板表面，培养24小时，根据抗原蛋白筛选平板的水解圈大小及菌株直径比选择用于豆粕抗原蛋白降解的菌株；所述的抗原蛋白筛选平板采用双层培养基铺板，上层培养基为营养培养基，下层培养基为选择性培养基，其中下层培养基的制备过程主要采用等电点沉降法，从豆粕浸出液中沉降出抗原蛋白大球蛋白沉淀和β‑伴球蛋白，溶于ddH2O得到抗原蛋白水溶液后，加入琼脂后铺板；所述的下层培养基的制备过程具体如下：称取5g豆粕，磨碎后过60目筛加入75mL pH 8.5的 Tris‑HCl缓冲液，30~50℃ 200rpm 振荡1h，9000g离心10~40 min，得到上清和沉淀，取沉淀再浸提一次，合并上清液，向上清液中加入0.01M Na2SO3，用2M HCl 调pH至6.4，4℃沉淀过夜，于6500 g，4℃，离心10~30 min，得到大球蛋白沉淀，沉淀后的上清液加NaCl至0.25M，调pH至4.0~6.0，室温搅拌30 min；9000g 4℃，离心30min，离心后的上清液稀释2倍，调pH至4.8，6500g, 20min 离心得到β‑伴球蛋白沉淀，将大球蛋白沉淀和β‑伴球蛋白沉淀溶于ddH2O，调pH至5.5~6.5，得到抗原蛋白水溶液，加入1.5%（w/v）的琼脂，115℃ 20min灭菌。