[发明专利]柱前衍生‑高效液相色谱检测发酵液中缬氨酸含量的方法在审
申请号: | 201610732912.7 | 申请日: | 2016-08-27 |
公开(公告)号: | CN106383181A | 公开(公告)日: | 2017-02-08 |
发明(设计)人: | 杜精精;杜石磊;马盼盼;闫自娟;曹建全 | 申请(专利权)人: | 河北圣雪大成制药有限责任公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 北京集智东方知识产权代理有限公司11578 | 代理人: | 张红,程立民 |
地址: | 051430 河*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | 本发明提供了一种柱前衍生‑高效液相色谱检测发酵液中缬氨酸含量的方法,包括以下步骤制备缬氨酸标准品溶液和样品溶液、制备衍生溶液、采用高效液相色谱法进行检测、记录峰面积,采用外标法计算样品中缬氨酸的含量。本方法样品预处理步骤简单,衍生试剂浓度低,仅以正己烷除去干扰因素,反应液直接稀释过滤后进样,简化了衍生步骤,既节约时间,又降低费用;检测设备为通用型高效液相色谱仪和色谱柱,外标法定量,不需购买内标物和专用仪器,成本低,易推广。 | ||
搜索关键词: | 衍生 高效 色谱 检测 发酵 缬氨酸 含量 方法 | ||
【主权项】:
柱前衍生‑高效液相色谱检测发酵液中缬氨酸含量的方法,其特征在于:包括以下步骤:a、制备缬氨酸标准品溶液和样品溶液;b、制备衍生溶液:将缬氨酸标准品溶液或样品溶液加入到具塞比色管中;再加入衍生试剂溶液,摇匀后静置反应1h;再加入正己烷,摇匀,静置分层;然后除去正己烷层,将缬氨酸标准品或样品层稀释5倍,微孔滤膜过滤,得到缬氨酸标准品衍生液或样品衍生液,待测;其中缬氨酸标准品溶液或样品溶液与衍生试剂溶液的体积比为1:1,缬氨酸标准品溶液或样品溶液与正己烷的体积比为1:2;c、采用高效液相色谱法进行检测:将缬氨酸标准品衍生液与样品衍生液分别注入高效液相色谱仪,色谱条件如下:流动相A:乙腈;流动相B:乙酸钠溶液;液相色谱仪:带紫外检测器,4.6*250mm C18色谱柱;进样量:10‑50μL;柱温:30‑40℃;流速:1.0mL/min;波长:254nm;d、记录峰面积,采用外标法计算样品中缬氨酸的含量。
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