[发明专利]一种铁皮石斛干药材分子鉴定方法及其应用有效
| 申请号： | 201610740265.4 | 申请日： | 2016-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN106399474B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 姚辉;杨培;韩建萍;陈士林;宋经元;杨兵勋;马双姣 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所;浙江天皇药业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 100193 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种名贵中药铁皮石斛干药材分子鉴定方法及其应用，可有效解决铁皮石斛干药材快速鉴定问题。具体步骤如下：(1)以改良的DNA提取方法制备待测样品DNA模板；(2)通过特异的PCR扩增引物和反应参数，扩增样品rDNA ITS2片段；(3)对扩增产物进行测序，获得铁皮石斛干药材的ITS2序列；(4)构建样品的ITS2序列NJ树。本发明能够实现铁皮石斛干药材、基原植物、种子种苗等的快速、准确鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 铁皮石斛 药材 分子鉴定 待测样品 反应参数 快速鉴定 扩增产物 名贵中药 有效解决 种子种苗 原植物 测序 构建 扩增 制备 应用 改良 | ||
【主权项】：
1.一种鉴别铁皮石斛干药材的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样品的DNA提取：取铁皮石斛干燥药材20‑30mg，切碎后使用MM400球磨仪粉碎，加入核分离液500‑1000μL，充分混匀，7000r/min离心5min，弃上清，加入核分离液500‑1000μL，重复此步骤3‑5遍至上清不粘稠；其余步骤参照植物基因组DNA提取试剂盒标准操作方法进行；核分离液的配比为：pH8.0的Tris‑HCl终浓度100mmol·L‑1，pH8.0的EDTA终浓度20mmol·L‑1，NaCl终浓度0.7mol·L‑1，2％PVP‑40W/V，以上各物质配成溶液后灭菌，使用之前加入β‑巯基乙醇0.4％V/V；2)PCR扩增ITS2序列：所述的PCR扩增引物为正向DO‑F：5’‑GGCGTCAAGCATTTTATCTCTCC‑3’；反向DO‑R：5’‑AATCCTCGTAAGTTTCTTTTCCTCC‑3’；所述的PCR扩增体系为25μL，包含2×TaqPCRMix12.5μL，2.5μmol·L‑1的特异引物正反向各1.0μL，DNA模板溶液10.5μL；3)对ITS2序列测序结果进行拼接，获得ITS2序列；4)构建样品的ITS2序列NJ树。
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