[发明专利]一种海水珍珠粉中氨基酸的HPLC检测方法

摘要

本发明公开了一种海水珍珠粉中氨基酸的HPLC检测方法，主要包括试样配制、标样配制、流动相配制、反应液配制、色谱条件设定、色谱检测等步骤。运用本发明检测方法，能够有效检测出海水珍珠粉中氨基酸的含量，从而鉴别其真假。HPLC(高效液相色谱)方法则是一种综合的、整体的鉴别手段，其功用范围在于鉴别真伪，并还可评价药材的质量均一性和稳定性。有关珍珠HPLC的研究文献未见报道，因此，研究珍珠HPLC是十分必要的，具有重要意义和应用价值。

主权项

一种海水珍珠粉中氨基酸的HPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取试样1g于10ml的安瓿瓶中，准确加盐酸6ml，将安瓿瓶封口，冷却后，置于100度恒温干燥箱中反应15h，然后，取出安瓿瓶冷却至室温、过滤，移取1ml滤液于25ml的容量瓶中，加水稀释，稀释液通过0.5um孔径滤膜，待用；(2)用0.07mol/L的柠檬酸钠稀释混合标样25位，待用；(3)流动相配制：流动相A液，取60g柠檬酸钠，溶解于3L水中，加乙醇220ml，加高氯酸55ml，加水稀释至3.5L,然后用氢氧化钠调节pH值为3.0，并通过0.5um孔径的滤膜过滤；流动相B液配制，取柠檬酸钠60g，取硼酸12.5g，溶解于850ml的水中，加4mol/L的氢氧化钠溶液30ml，然后加水稀释至1L，用氢氧化钠溶液调节pH至10，并通过0.5um孔径的滤膜过滤；流动相C液，取氧氧化钠5g，加水稀释到550ml，并通过0.5um孔径的滤膜过滤；(4)反应液配制：硼酸缓冲溶液，浓度为0.4N,pH为10.4；A反应液配制：用量筒量取500ml的硼酸缓冲溶液，加入试剂瓶中，加入0.18ml的氧酸钠溶液，混合均匀；B反应液配制：取邻苯二甲醛500mg，加入乙醇8ml，2‑巯基乙醇1ml，用硼酸缓冲溶液定容到500ml；(5)色谱条件：色谱分析柱、保护柱为钠型分析柱，反应管为岛津蛇形反应管，术箱温度为50度，流动相流速为0.5ml/min，反应液流速2.5ml/min，检测器为荧光检测器，激发波长350nm，发射波长450nm；(6)用微量注射器注入10ul试样及标样于高效液相色谱上进入分析，得色谱图，根据出峰时间鉴定样品中氨基酸的种类，将样品峰面积与标样对比，计算样品中各氨基酸的含量。