[发明专利]一种利用酱油滤渣制备D-葡萄糖基神经酰胺的方法

摘要

本发明涉及一种利用酱油滤渣制备D‑葡萄糖基神经酰胺的方法，其特征在于采用以下步骤：活化菌株：将鞘氨醇单胞菌属菌株和解脂亚罗酵母菌株，分别接种至100 mL活化培养基；B将步骤A获得的鞘氨醇单胞菌属菌株活化培养液P和解脂亚罗酵母菌株活化培养液Q有氧发酵培养36~72 h，得复合菌种发酵液；C、将复合菌种发酵液与酱油滤渣混合，加入复合发酵罐，静态培养，在25~30℃培养48~96 h，获得富含菌体细胞的滤渣；高压均质2次，获得破壁细胞匀浆物；D、将破壁细胞匀浆物与乙醇溶液混合，滤得沉淀物，得D‑葡萄糖基神经酰胺提取物。本发明通过对酱油滤渣的合理利用，可以变废为宝，有益于酱油产业提高经济效益，大大提高了酱油滤渣的资源利用和高价值附产物开发。

主权项

1.一种利用酱油滤渣制备D‑葡萄糖基神经酰胺的方法，其特征在于采用以下步骤：A、活化菌株：用接种环分别量取10‑15 环鞘氨醇单胞菌属菌株，保藏号CICC 10694，10‑15 环解脂亚罗酵母菌株，保藏号CICC 1441；将上述两菌株分别接种至100 mL活化培养基，所述活化培养基由质量比0.5％的蛋白胨、0.6％的NaCl、5％的蔗糖、余量蒸馏水组成；并于恒温培养箱中培养24‑72 h，培养温度为 28±2 ℃，控制pH为7.0‑7.2，分别得到鞘氨醇单胞菌属菌株活化培养液P和解脂亚罗酵母菌株活化培养液Q；所述鞘氨醇单胞菌属菌株活化培养液P中菌浓度为1.0×105‑1.0×106 CFU/mL，所述解脂亚罗酵母菌株活化培养液Q中菌浓度为1.0×105‑1.0×106 CFU/mL；B、制备复合菌种发酵液：将步骤A获得的鞘氨醇单胞菌属菌株活化培养液P和解脂亚罗酵母菌株活化培养液Q以重量百分比2∶1或1：1或1：2混合，得混合活化培养液A，将混合活化培养液A转移至液体发酵培养基B，所述液体发酵培养基B由质量比0.30‑0.50％蛋白胨、4‑6％蔗糖、0.25‑0.35％硫酸镁、0.60‑0.09％磷酸二氢钾、0.20‑0.40％硫酸钾、余量蒸馏水组成，控制发酵温度 25‑40 ℃，pH 为 7.2‑7.5，有氧发酵培养36‑72 h，得复合菌种发酵液；所述混合活化培养液A：液体发酵培养基B的重量比为5:95；C、将重量比20‑40% 复合菌种发酵液与60‑80%酱油滤渣混合，加入复合发酵罐，静态培养，在25‑30℃培养48‑96 h，控制发酵罐内空间氧浓度为0.010‑0.025 mol/L，发酵完成后使用100目不锈钢滤网过滤掉固体残渣，得过滤液；使用0.45 μm聚丙烯过滤器过滤除水，获得富含菌体细胞的滤渣；将富含菌体细胞的滤渣加入等重量的蒸馏水，混合均匀后，通过ATS高压均质机，常温，90 Mpa，高压均质2次，获得破壁细胞匀浆物；D、将破壁细胞匀浆物与质量分数为95%的乙醇溶液按重量比1:5在常温下混合，搅拌均匀放置过夜，滤得沉淀物，在50‑60 ℃烘干，得D‑葡萄糖基神经酰胺提取物。