[发明专利]一种酶催化合成谷胱甘肽的方法

摘要

本发明公开了一种酶催化合成谷胱甘肽的方法，包括以下步骤：S1、将γ‑谷氨酰半胱氨酸合成酶液和谷胱甘肽合成酶液混合，得混合液A，再将混合液A与乙酸激酶液混合，得混合液B；S2、在混合液B中加入固定化载体，搅拌固定化，过滤得固定化酶；S3、将谷氨酸、L‑半胱氨酸、甘氨酸、硫酸镁、ATP、乙酰磷酸配成反应液，加入固定化酶，搅拌反应；S4、反应完成后，过滤反应液，滤液经提取精制成谷胱甘肽。本发明的方法合成效率高：反应液产品含量达到10g/L以上，底物转化率达到90%以上；通过引入乙酸激酶构建ATP再生偶联系统，大幅减低ATP的投料量，明显减低生产成本；固定化酶可以重复利用，稳定性好。

主权项

1.一种酶催化合成谷胱甘肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、将γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶液和谷胱甘肽合成酶液混合，得混合液A，再将混合液A与乙酸激酶液混合，得混合液B；/nS2、在混合液B中加入固定化载体，搅拌固定化，过滤得固定化酶；/nS3、将谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸、硫酸镁、ATP、乙酰磷酸配成反应液，加入固定化酶，搅拌反应；/nS4、反应完成后，过滤反应液，滤液经提取精制成谷胱甘肽；所述混合液A由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶液和谷胱甘肽合成酶液按酶蛋白量1：1的比例混合而得；/n所述混合液B由混合液A与乙酸激酶液按酶蛋白量1：1的比例混合而得；/n所述固定化载体为甲壳胺-硅胶复合物；/n所述固定化载体按照以下方法制备：称取1重量份甲壳胺加入150重量份的1wt％醋酸溶液中，搅拌溶解，再加入10重量份粒径为0.1～0.5mm的硅胶颗粒，搅拌12h，过滤后加入100重量份0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2h，使甲壳胺和硅胶颗粒均匀结合在一起，过滤并用纯化水清洗至中性，加入100重量份的2wt％戊二醛溶液，搅拌4h，进行交联反应和活化甲壳胺基团，过滤后用纯化水清洗2～3次得到甲壳胺-硅胶复合物；/n所述固定化载体的用量是：每40mg蛋白加入1g固定化载体；/n步骤S2所述搅拌固定化的条件是：温度5℃，时间3h；/n所述反应液的配方是：谷氨酸25mmol/L、L-半胱氨酸20mmol/L、甘氨酸25mmol/L、硫酸镁5mmol/L、ATP5mmol/L、乙酰磷酸40mmol/L；所述固定化酶的用量是15g/L；/n步骤S3所述搅拌反应的条件是：用氢氧化钠调节反应液pH为6，反应温度30℃，反应时间4h。/n