[发明专利]一种金藻与光合细菌混合发酵的方法

摘要

本发明提供了一种金藻和光合细菌混合发酵的方法，属于生物技术领域，具体是提供了一种球等鞭金藻与沙氏外硫红螺菌混合发酵的方法，将球等鞭金藻，沙氏外硫红螺菌分别通过种子活化，培养，然后在光照发酵罐中混合发酵，能大大提高球等鞭金藻的含量，是正常培养的5‑10倍的含量。

主权项

1.一种延长金藻有效期的金藻与光合细菌混合发酵的方法，其特征在于，/n采用球等鞭金藻与紫硫光合细菌中的沙氏外硫红螺菌菌种按以下步骤进行培养：/n沙氏外硫红螺菌半固体种子活化培养：将沙氏外硫红螺菌种穿刺在半固体沙氏外硫红螺菌培养基中，25-30℃，光照强度为：1000-6000lux，光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化的沙氏外硫红螺菌种；/n沙氏外硫红螺菌种子培养：将活化的菌种接种至沙氏外硫红螺菌种子液体培养基中，温度25-30℃，光照强度为：1000-6000lux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的OD650≥1.2，活菌数≥6亿cfu/ml即为种子培养液；/n球等鞭金藻种子培养：将球等鞭金藻接种到2 000 mL三角烧瓶中的金藻培养基进行活化纯培养,光照为3 000 lx,温度为27℃,不充气培养,每天摇动搅拌6次,培养4-9天，待球等鞭金藻的含量≥100万个/ml，即为球等鞭金藻种子培养液；/n发酵培养：将球等鞭金藻种子培养液与发酵培养基以1：4-1：8的接种量接种，同时将沙氏外硫红螺菌种子培养液与发酵培养基按1：10-1：15的接种量接入，在光照培养罐中间歇通气培养，培养温度25-28℃，光照强度为：1000-6000lux，搅拌速度为80转/分钟，光暗比为12L：12D，即每天12小时光照，12小时黑暗培养，利用磷酸调PH，使PH不高于8.5，培养6-10天，待血球计数板检测其沙氏外硫红螺菌不低于30亿cfu/ml，球等鞭金藻不低于4000万个/ml，即可放罐，灌装，包装成品；/n其中，所述的半固体沙氏外硫红螺菌培养基为:氯化铵0.8-2.0g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L，碳酸氢钠1-3 g/L,醋酸钠2-5g/L，九水硫化钠0.1-1g/L，琼脂8-10g/L，氯化钠20-30g/L, 121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2,其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌；/n其中，所述的沙氏外硫红螺菌种子液体培养基为：氯化铵0.8-2.0g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，氯化镁0.1-0.5g/L， 醋酸钠2-10 g/L, 碳酸氢钠1-3g/L，氯化钠20-30g/L,121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2；/n其中，所述的金藻液体培养基为: 硝酸钠0.1 g，磷酸二氢钾0.01g，微量元素1ml，复合维生素1ml,海水1L, 121℃灭菌15分钟；/n其中，所述的发酵培养基：硝酸钠0.1 g，氯化铵0.8g/L，氯化钾0.5g/L，EDTA二钠0.5g/L，氯化镁0.2g/L，醋酸钠4g/L，碳酸氢钠6g/L，氯化钠2g/L，硅酸钠0.01g/L，微量元素1ml，复合维生素1ml,用磷酸调PH至7.2-7.5；/n其中，所述的微量元素，其组成为： EDTA二钠4.5g，硫酸亚铁0.5g，浓硫酸0.05ml，硫酸锌30mg，氯化锰0.2g，硼酸30mg，氯化钴20mg，氯化铜10mg，氯化镍2mg，钼酸钠3mg，柠檬酸铁4 g，蒸馏水1000毫升，PH3-4，121℃灭菌15分钟；/n其中，所述的复合维生素，其组成为：VB