[发明专利]一种美拉诺坦Ⅰ的制备方法

摘要

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种美拉诺坦Ⅰ的制备方法。本发明提供的方法如下：液相合成法制备三肽片段：Fmoc‑His(Trt)‑D‑Phe‑Arg(Pbf)‑OH，然后将其作为一个单体与肽序中的其他保护氨基酸通过Fmoc固相合成法依序偶联，制备肽树脂，经裂解纯化过程，制备得美拉诺坦Ⅰ精肽产品。本发明能够避免合成过程中第6位His和第7位D‑Phe发生消旋化，产生难以除去的对映异构体杂质，提高了终产品纯度及收率，降低了生产成本，工艺过程稳定，适宜工业化生产。

主权项

1.一种美拉诺坦Ⅰ的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)Fmoc-His(Trt)-OSu的制备/n准确称取1.5mol的Fmoc-His(Trt)-OH 929.6g和1.65mol的HOSu 189.9g溶于2.5L四氢呋喃中，低温0℃搅拌；准确称取1.65mol的DCC 340.4g，溶于1L四氢呋喃中，缓慢滴加到上述溶液中，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应完成后，抽滤，浓缩反应液至900-1000mL，向浓缩液中加入5L石油醚，析出白色固体，溶液-20℃静置1h，静置后抽滤，滤饼以1L乙酸乙酯溶解，加入5L石油醚，析晶，抽滤，滤饼真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-OSu 949.4g；/n(2)Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH的制备/n准确称取1.0mol的H-D-Phe-OH 165.2g和1.1mol的碳酸钠116.6g溶于2L水中，低温0℃下缓慢加入步骤(1)中所得Fmoc-His(Trt)-OSu的四氢呋喃溶液4L，Fmoc-His(Trt)-OSu的量为788.5g，即1.1mol，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应完全后，过滤，低温0℃下向滤液中加入饱和柠檬酸水溶液，调节溶液pH值至2～3，析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次，干燥后用2L乙酸乙酯重新溶解，加入10L石油醚析晶，过滤，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH 671.0g；/n(3)Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu的制备/n准确称取0.7mmol步骤(2)中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OH 536.8g和0.84mol的HOSu96.7g溶于1800mL二氧六环中，低温0℃搅拌，准确称取0.84mol的DCC 173.3g，溶于500mL四氢呋喃中，缓慢滴加到上述溶液中，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应完成后，抽滤，浓缩反应液至700-800mL，向浓缩液中加入4L石油醚，析出白色固体，溶液-20℃静置1h，静置后抽滤，滤饼以700mL乙酸乙酯溶解，加入3.5L石油醚，析晶，抽滤，滤饼真空干燥后，得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu 532.1g；/n(4)Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH的制备/n准确称取H-Arg(Pbf)-OH 231.3g和碳酸钠58.3g溶于1L水中，低温0℃下缓慢加入步骤(3)中所得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-OSu 475.2g的四氢呋喃溶液2.5L，搅拌反应，TLC监测反应终点，反应完全后，过滤，低温0℃下向滤液中加入饱和柠檬酸水溶液，调节溶液pH值至2～3，析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次，干燥后用3L乙酸乙酯重新溶解，加入15L石油醚析晶，过滤，抽干，真空干燥得Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH 508.9g；/n(5)Fmoc-Val-Rink Amide resin的制备/n准确称取Rink Amideresin 55.6g，树脂初始替代度为0.90mmol/g，合成规模为50mmol，置于合成柱中，用500mL DMF洗涤两次，加入500mL DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，加入Fmoc-Val-OH/DIC/HOBt的混合溶液，搅拌反应3h，抽掉反应液，用500mL DMF洗涤3次，然后再用DCM、甲醇各洗涤3次，真空干燥后得Fmoc-Val-Rink Amide resin 60.9g，所述Fmoc-Val-OH/DIC/HOBt的混合溶液的制备方法为：称取100mmol Fmoc-Val-OH 33.9g和110mmolHOBt 14.9g置于溶解瓶中，加入250ml DMF溶液搅拌溶解，低温0℃下加入110mmolDIC17.0ml，活化5min；/n(6)美拉诺坦Ⅰ肽树脂的制备/n将步骤(5)中的Fmoc-Val-Rink Amide resin 60.9g置于合成柱中，合成规模50mmol，加入500mL DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，500mLDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液500mL脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用DMF洗涤6次，每次500mL；称取Fmoc-Pro-OH33.7g、HOAt 14.9g用1L DMF溶解，低温0℃中预冷15-20min，然后加入DIC 17.0ml活化5min，将溶液加入到树脂中，反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用DMF洗涤6次，每次500mL；随后再脱保护，如此反复循环操作，依次偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(OtBu)-OH，向反应柱中加入1600mL乙酰化试剂，反应1h，反应结束，树脂用DMF、DCM和甲醇分别洗涤3次，每次500mL，真空干燥得美拉诺坦Ⅰ肽树脂195.5g，所述乙酰化试剂为400ml乙酸酐、350ml吡啶和850ml DMF混合溶液；/n(7)美拉诺坦Ⅰ粗肽的制备/n将步骤(6)得到的195.5g美拉诺坦Ⅰ肽树脂加入到预冷的1.5L裂解液中，室温下搅拌反应3h；裂解反应结束，过滤树脂，100mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至1L，浓缩液倒入10L预冷的叔丁基甲醚中，析出白色沉淀，静置1h后，过滤，叔丁基甲醚洗涤6次，真空干燥得美拉诺坦Ⅰ粗肽85.6g，所述裂解液为体积配比为TFA/TIS/苯酚/苯甲硫醚/H