[发明专利]一种检测活细胞细胞膜表面张力变化的生物探针

摘要

本发明属于细胞生物学及分子生物学技术领域，是一种基于FRET技术的生物探针，它能够动态地检测活细胞细胞膜表面张力的变化，具体公开了一种检测活细胞细胞膜表面张力变化的生物探针。该探针包括FRET荧光蛋白对ECFP与YPet、弹性序列Linker、Lyn序列以及K‑ras序列五个部分。该探针与pcDNA3.1(+)的重组质粒转染到活细胞后，可以在细胞中自发表达出荧光蛋白融合探针，定性地检测细胞膜张力的变化，且对细胞原有功能没有影响。该探针实现了在活体细胞内对细胞膜表面张力变化的动态检测，具有成本低、对细胞无毒副作用等特点，为研究细胞膜张力变化提供了一种可视化工具。

主权项

1.一种检测活细胞细胞膜表面张力变化的生物探针，其特征在于，该生物探针包括FRET荧光蛋白对ECFP(1‑2)、YPet(1‑4)、弹性序列Linker(1‑3)、Lyn序列(1‑1)和K‑ras序列(1‑5)五个部分，由亚克隆技术对DNA序列剪切拼接，并与载体质粒pcDNA3.1(+)形成重组质粒；其中，Lyn的氨基酸序列为：AAATMGCIKSKRKDNLNDDGVDMKT其对应的DNA序列为：GCGGCCGCCACCATGGGCTGCATCAAGAGCAAGCGCAAGGACAACCTGAACGACGACGGCGTGGACATGAAGACC；K‑ras的氨基酸序列为：KKKKKKSKTKCVIM对应的DNA序列为：AAGAAGAAGAAGAAGAAGAGCAAGACCAAGTGCGTGATCATG；弹性序列Linker的氨基酸序列为：GPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGA对应的DNA序列为：GGTCCAGGAGGCGCAGGACCTGGCGGGGCTGGACCGGGTGGCGCGGGACCCGGCGGAGCCGGCCCAGGTGGGGCGGGCCCTGGTGGTGCTGGTCCGGGAGGGGCAGGGCCCGGAGGTGCC。