[发明专利]一种生物合成制备人GLP‑1多肽或其类似物的方法

摘要

本发明涉及一种生物合成制备人胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)及其类似物的方法。本发明采用基因工程技术，构建重组大肠杆菌表达GLP‑1融合蛋白(GLP‑1 fusion protein)，并在融合蛋白内设计蛋白酶切位点，具有形如A‑B‑C结构的基因序列，其中A为伴侣蛋白基因，B为编码包含酶切位点的连接肽的核苷酸序列，C为编码GLP‑1或其类似物的基因。重组工程菌经诱导表达后，融合蛋白纯化后经酶切，可以获得GLP‑1及其类似物，经检测具备生物活性。本发明提供的GLP‑1及其类似物制备方法简单快捷，生产条件温和、产物分离提取方便、工艺简单，具有良好的产业化前景。

主权项

一种融合基因，所述的融合基因具有形如A‑B‑C结构的基因序列，其中A为伴侣蛋白基因，B为编码包含酶切位点的连接肽的核苷酸序列，C为编码GLP‑1或其类似物的基因；所述融合基因中，A部分的伴侣蛋白基因可选自TrxA、DsbA、DsbC、Sumo、GST，Intein等；B部分的酶切位点连接肽可选自肠激酶、凝血酶、SUMO Protease等；C部分为编码GLP‑1或其类似物的基因序列，所述的GLP‑1或其类似物可选自GLP‑1(7‑37),GLP‑1(8‑37),GLP‑1(9‑37),GLP‑1(10‑37),GLP‑1(11‑37),GLP‑1(12‑37),GLP‑1(13‑37),GLP‑1(14‑37),GLP‑1(15‑37)或GLP‑1多肽类似物,包括:Arg34‑GLP‑1(7‑37),Arg26‑GLP‑1(7‑37),Lys36‑GLP‑1(7‑37),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(7‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(7‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(7‑40),Arg26Lys36‑GLP‑1(7‑37),Arg34Lys36‑GLP‑1(7‑37),Arg26Lys39‑GLP‑1(7‑39),Arg34Lys40‑GLP‑1(7‑40),Arg26,34Lys36,39‑GLP‑1(7‑39),Arg26,34Lys36,40‑GLP‑1(7‑40),Gly8Arg26‑GLP‑1(7‑37),Gly8Arg34‑GLP‑1(7‑37),Gly8Lys36‑GLP‑1(7‑37),Gly8Arg26,34Lys36‑GLP‑1(7‑37),Gly8Arg26,34Lys39‑GLP‑1(7‑39),Gly8Arg26,34Lys40‑GLP‑1(7‑40),Gly8Arg26Lys36‑GLP‑1(7‑37),Gly8Arg34Lys36‑GLP‑1(7‑37),Gly8Arg26Lys39‑GLP‑1(7‑39),Gly8Arg34Lys40‑GLP‑1(7‑40),Gly8Arg26,34Lys36,39‑GLP‑1(7‑39),Gly8Arg26,34Lys36,40‑GLP‑1(7‑40),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(7‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(7‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(7‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(7‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(7‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(7‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(7‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(7‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(1‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(1‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(1‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(1‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(1‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(1‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(1‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(1‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(2‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(2‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(2‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(2‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(2‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(2‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(2‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(2‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(3‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(3‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(3‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(3‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(3‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(3‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(3‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(3‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(4‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(4‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(4‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(4‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(4‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(4‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(4‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(4‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(5‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(5‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(5‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(5‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(5‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(5‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(5‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(5‑45),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(6‑38),Arg26,34Lys39‑GLP‑1(6‑39),Arg26,34Lys40‑GLP‑1(6‑40),Arg26,34Lys41‑GLP‑1(6‑41),Arg26,34Lys42‑GLP‑1(6‑42),Arg26,34Lys43‑GLP‑1(6‑43),Arg26,34Lys44‑GLP‑1(6‑44),Arg26,34Lys45‑GLP‑1(6‑45),Arg26Lys38‑GLP‑1(1‑38),Arg34Lys38‑GLP‑1(1‑38),Arg26,34Lys36,38‑GLP‑1(1‑38),Arg26Lys38‑GLP‑1(7‑38),Arg34Lys38‑GLP‑1(7‑38),Arg26,34Lys36,38‑GLP‑1(7‑38),Arg26,34Lys38‑GLP‑1(7‑38),Arg26Lys39‑GLP‑1(1‑39),Arg34Lys39‑GLP‑1(1‑39),Arg26,34Lys36,39‑GLP‑1(1‑39),Arg26Lys39‑GLP‑1(7‑39),Arg34Lys39‑GLP‑1(7‑39)或Arg26,34Lys36,39‑GLP‑1(7‑39)。