[发明专利]定点突变ApoE基因与LDLR基因的方法有效
| 申请号： | 201610756699.3 | 申请日： | 2016-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN106244557B | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 牟玉莲;李奎;黄雷;程英;徐奎 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/55;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了定点突变ApoE基因与LDLR基因的方法。本发明公开的定点突变ApoE基因与LDLR基因的方法，包括向受体动物细胞中导入靶向ApoE基因靶序列的gRNA的编码基因、靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因与Cas9的编码基因，得到ApoE基因与LDLR基因被定点突变的动物细胞；实验证明，本发明的靶向ApoE基因靶序列的gRNA和靶向LDLR基因靶序列的gRNA能分别高效识别ApoE基因与LDLR基因，在它们的作用下，APOE和LDLR基因的平均双等位基因编辑效率可达31％，表明本发明的方法可以用来定点突变ApoE基因与LDLR基因。 | ||
| 搜索关键词： | 定点 突变 apoe 基因 ldlr 方法 | ||
【主权项】：
1.定点突变ApoE基因与LDLR基因的方法，为采用CRISPR/Cas9方法进行定点突变，其特征在于：所述CRISPR/Cas9方法中使用的ApoE基因靶序列为序列表中序列1的核苷酸序列；所述CRISPR/Cas9方法中使用的LDLR基因靶序列为序列表中序列3的核苷酸序列；所述定点突变ApoE基因与LDLR基因的方法，包括向受体动物细胞中导入靶向ApoE基因靶序列的gRNA的编码基因、靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因与Cas9的编码基因，得到ApoE基因与LDLR基因被定点突变的动物细胞；所述靶向ApoE基因靶序列的gRNA的序列为将序列表中序列2中的T替换为U得到的序列；所述靶向ApoE基因靶序列的gRNA的编码基因为序列表中序列2所示的DNA分子；所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的序列为将序列表中序列5中的T替换为U得到的序列；所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因为序列表中序列5所示的DNA分子；所述受体动物细胞为猪细胞。
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