[发明专利]一种铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建方法在审
| 申请号： | 201610759433.4 | 申请日： | 2016-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN107779450A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 杨忠太 | 申请（专利权）人： | 杨忠太 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 741000 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 一种铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建方法，以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA，分离纯化mRNA，LDPCR法反转录合成双链cDNA，以λTripIEX2为载体，构建铁皮石斛cDNA文库，文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位(pfu)的数目来表示，PCR扩增鉴定插入片段。成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库，原始文库的噬菌斑滴度为43×105pfu/mL，总克隆数为31×105，扩增后文库总滴度为68×109pfu/mL，对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，结果插入片段多分布在05～20kb之间，绝大部分在12～17kb左右。所构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 铁皮 石斛 互补 脱氧核糖核酸 表达 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建方法，以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA，分离纯化mRNA，LDPCR法反转录合成双链cDNA，以λTripIEX2为载体，构建铁皮石斛cDNA文库，文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位(pfu)的数目来表示，PCR扩增鉴定插入片段；成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库，原始文库的噬菌斑滴度为43×105pfu/mL，总克隆数为31×105，扩增后文库总滴度为68×109pfu/mL，对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，结果插入片段多分布在05～20kb之间，绝大部分在12～17kb左右；所构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。
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