[发明专利]一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法及应用，涉及免疫检测分析领域。所述方法将酶的高效催化性能与贵金属纳米粒子高的消光系数相结合，大大降低了酶的可视化检测浓度，同时酶浓度的微小变化可方便的通过所得纳米溶胶的颜色来区分，在一定的酶浓度范围内可通过肉眼直接半定量检测酶的浓度。将此方法与传统的酶联免疫方法(ELISA)相结合，可高灵敏的可视化检测各种肿瘤标志物、细菌、病毒等。该方法是基于纳米粒子直接原位生长导致溶液颜色从无色到有色的明显变化，不需要任何复杂的探针修饰过程和精密的仪器设备，使得该方法简单、低耗，因此具有很大的实用价值。

主权项

1.一种基于贵金属纳米粒子的可视化检测方法，其特征在于，包括1)含酶催化溶液制备的步骤；2)贵金属纳米粒子溶液制备的步骤；3)肉眼观察孔板中的颜色变化，并用相机拍照，得到可视化检测结果；4)用微孔板读数器读取孔板中金或银纳米粒子的溶液的吸光度值，将碱性磷酸酶ALP的浓度与所得吸光度值做线性拟合；其中：含酶催化溶液是将L‑抗坏血酸‑2‑磷酸酯三钠盐AA‑P溶解在二乙醇胺‑硝酸的缓冲溶液DEA buffer中，在孔板中与不同浓度的碱性磷酸酶ALP孵化得到；其中贵金属为金或银，其纳米粒子溶液是将氯金酸HAuCl₄或硝酸银AgNO₃加入到1)的溶液中启动氧化还原反应原位生长金或银纳米粒子得到；步骤1)中，L‑抗坏血酸‑2‑磷酸酯三钠盐AA‑P溶解在二乙醇胺‑硝酸的缓冲溶液DEA buffer中，取50‑500μL上述溶液与不同浓度的碱性磷酸酶ALP于4‑37℃下孵化0.5‑24h；步骤4)中，金或银纳米粒子的溶液的吸光度值是金或银纳米粒子的溶液在530nm或400nm处的吸光度值A_530nm or A_400nm，并将ALP的浓度与A_530nm或A_400nm做线性拟合。