[发明专利]串联piscidin抗菌肽PSP的构建及分泌表达

摘要

串联piscidin抗菌肽PSP的构建及分泌表达，涉及抗菌肽。提供一种串联piscidin抗菌肽PSP的构建方法、Larimichthys crocea‑Sciaenops ocellatus‑piscidin(PSP)抗菌肽串联基因枯草芽孢杆菌表达载体Trx‑PSP‑pht43的构建方法、重组表达载体Trx‑PSP‑pht43在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB800N中的转化方法、重组枯草芽孢杆菌Trx‑PSP‑pht43Bacillus subtilis WB800N在摇瓶中的诱导表达。表达系统简单、表达产量较高、表达产物生物活性强、生产成本低、无毒害物质。

主权项

串联piscidin抗菌肽PSP的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)大黄鱼Larimichthys crocea‑piscidin基因保存于pmd‑19T载体，其成熟核苷酸序列如SEQ1所示；2)美国红鱼Sciaenops ocellatus‑piscidin基因保存于pmd‑19T载体，其成熟核苷酸序列如SEQ2所示；3)人工合成编码Trx蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ3所示；4)将步骤1)和2)中piscidin基因片段通过PCR方法添加互补序列，使用Eco31I快切酶定向连接方法，对PCR产物进行酶切后，暴露互补序列，使用T4连接酶进行定向连接，构建Larimichthys crocea‑Sciaenops ocellatus‑piscidin(PSP)抗菌肽串联基因；5)在Larimichthys crocea‑Sciaenops ocellatus‑piscidin(PSP)抗菌肽串联基因N端加入Trx序列，再构建入pmd19‑T载体，重组质粒命名为Trx‑PSP‑pmd19‑T载体。