[发明专利]专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法

摘要

本发明涉及一种专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法，步骤如下⑴收集样品细胞、⑵裂解细胞、⑶去除蛋白、⑷沉淀DNA、⑸乙醇洗涤、⑹溶解DNA、⑺保存DNA，将DNA样品做好标记，放于指定位置‑20℃或‑80℃中保存。本发明提供的方法相较于离心柱法和磁珠法，大大降低实验成本，相较于离心柱法和磁珠法，大大缩短DNA提取时间，相较于离心柱法，大大提高DNA提取的量。DNA纯度在合理的区间范围之内。提取得到的基因组DNA不影响下游的分子实验。

主权项

一种专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法，其特征在于：步骤如下：⑴收集样品细胞用2个口腔拭子分别刮取口腔左右两侧的口腔上皮细胞，并把拭子头转移到2个含1ml去离子水的1.5ml的离心管中；震动离心管，使细胞从拭子上尽可能多的脱落，然后将2个含有口腔上皮细胞的1.5ml管离心，转速：800×g，时间：2分钟；吸弃上清液，每个EP管加入500μl的无菌水，将其中一个EP管的细胞转移到另一个EP管中，离心，转速：800×g，时间：2分钟；⑵裂解细胞吸弃上清液，向每管中加入500μl的溶液A，溶液A含9.5mmol/L的Tris‑Cl，2mmol/L的EDTA，1％的SDS，3％的Triton‑100，pH＝8.5，加后加入50μl浓度为1mg/ml的蛋白酶K溶液，涡旋振荡10秒钟，放入55℃水浴内15分钟；每5分钟振荡一次；⑶去除蛋白短暂离心，将管壁上的残留液体离至管底；加入200μl的醋酸钠‑冰醋酸溶液，剧烈振荡20秒钟，管中出现白色絮状物；12000×g离心3分钟，使白色物质沉淀到离心管底部；⑷沉淀DNA吸取400‑500μl的上清液到新的EP管中，加入800μl溶液B，溶液B组成为无水乙醇：异丙醇＝1:3，振荡10秒钟，使上清液与异丙醇充分混合；12000×g离心3分钟；⑸乙醇洗涤吸弃上清，加入800μl的75％乙醇，振荡5秒钟，12000×g离心2分钟；吸弃上清，重复上述步骤一次；⑹溶解DNA小心吸弃上清，室温下敞口干燥10分钟；将DNA溶解到100μl的无菌水中；⑺保存DNA将DNA样品做好标记，放于指定位置‑20℃或‑80℃中保存。