[发明专利]基于序列多态性区别clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV的PCR-RFLP方法

摘要

本发明公开基于序列多态性区别clade 2.3.4和clade 2.3.4.4H5AIV的PCR‑RFLP方法。包括以下步骤：1)从检测样品中提取病毒基因组RNA；2)用引物P1和P2对clade2.3.4和clade 2.3.4.4病毒进行RT‑PCR扩增，得到相应的HA基因片段；3)取RT‑PCR扩增产物经Sac I酶切后进行RFLP分析。本发明的方法仅需上游引物P1和下游引物P2，并仅需常规限制性内切酶Sac I进行RFLP酶切后加以鉴别，无需复杂繁琐的条件优化过程，本发明在clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV快速鉴别诊断上快捷准确，可填补国内外相关领域的研究空白。

主权项

基于序列多态性区别clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV的PCR‑RFLP方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从检测样品中提取clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV基因组RNA；2)用引物P1和P2同时对clade 2.3.4和clade 2.3.4.4 H5 AIV基因组RNA进行RT‑PCR扩增，得到相应的HA基因片段，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，大小为499bp；3)取RT‑PCR扩增产物，经Sac I酶切后进行RFLP分析。