[发明专利]一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法

摘要

本发明公开了一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液及其制备方法；本发明的复合益生菌液含有布拉氏酵母菌、木醋杆菌、植物乳杆菌、青春双歧杆菌、地衣芽孢杆菌，丁酸梭菌，阿拉伯糖，低聚木糖，细菌纤维素等，本发明的益生菌与益生元进入人体后可以快速减少肠道对葡萄糖等糖原的吸收，从而控制体重与降低血糖；临床试验结果表明：口服本发明的复合益生菌液的患者，初步判定在血糖达标时间、改善糖耐量、改善胰岛素及c肽释放方面要优于单纯应用二甲双胍者；并且有显著的减肥效果；另外，本发明的复合益生菌液在改善胰岛素抵抗、保护胰岛细胞功能方面确有疗效，并且无副作用。

主权项

一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌液，其特征在于，所述复合益生菌液组份及重量份数配比为：丁酸梭菌种子液10‑20份、脱脂大豆粉10‑20份、布拉氏酵母菌种子液10‑40份、植物乳杆菌种子液5‑15份、木醋杆菌种子液5‑10份、青春双歧杆菌种子液10‑20份、地衣芽孢杆菌种子液10‑20份、红糖30‑60份、脱脂奶粉10‑20份、蜂蜜10‑20份、氯化钠2‑4份、阿拉伯糖10‑20份、低聚木糖2‑10份和纯化水800份，其制备过程包括：（1）.在1000L发酵罐A中加入红糖30‑60份、脱脂大豆粉10‑20份、氯化钠1‑2份、纯化水400份，混匀后再在115℃下保温30分钟，然后降温至30℃；再向发酵罐A中加入布拉氏酵母菌种子液10‑40份、植物乳杆菌种子液5‑15份、木醋杆菌种子液5‑10份，在30℃‑35℃下培养72‑120小时，每24小时搅拌30分钟；培养前期48小时，通气量为每分钟的液气比为1：0.8，通气过程维持发酵液pH5.8‑6.8，48小时后不再通气，同时不再调pH，继续静置培养，待PH降低至4.2，布拉氏酵母菌含量不低于1亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于1g/L，残葡萄糖含量低于0.2 g/L，总菌含量不低于10亿CFU/ml，即可停止A罐的第一阶段发酵；（2）.在600L发酵罐B中加入蜂蜜10‑20份、脱脂奶粉10‑20份、阿拉伯糖10‑20份、低聚木糖2‑10份、氯化钠1‑2份、纯化水400份，混匀后再在108℃下保温30分钟，然后降温至37℃；向发酵罐B中加入丁酸梭菌种子液10‑20份、青春双歧杆菌种子液10‑20份、地衣芽孢杆菌种子液10‑20份，在35℃‑37℃下静止厌氧培养72‑96小时，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于20亿CFU/ml，总菌含量不低于30亿CFU/ml，即可停止发酵；当两个发酵罐达到指标后，将发酵罐B中的菌液移至发酵罐A中，搅拌均匀，在30℃‑33℃下静止继续厌氧培养24‑48小时，检测其PH降至3.0‑3.2，总活菌含量不低于30亿CFU/ml，细菌纤维含量不低于0.5g/L，检测丁酸梭菌的芽孢含量不低于15亿CFU/ml，即可停止发酵，无菌灌装，100 ml/瓶，包装成品；其中，布拉氏酵母菌种子液按以下方法制备：取出菌种保藏管，用YPD固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L酵母菌培养基的 5L大三角瓶中，30℃震荡培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为布拉氏酵母菌种子液接种；其中，所述的YPD固体培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20 g，水1000mL；其中，所述的酵母菌培养基：红糖15 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸铵3 g/L，硫酸镁0.5 g/L；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，植物乳杆菌种子液按以下方法制备：取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9L乳酸菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过50亿CFU/ml，即可作为植物乳杆菌种子液接种，其中，所述的MRS培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸钠5 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，吐温‑80 1 ml/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g/L，碳酸钙20 g/L；其中，所述的乳酸菌培养基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠0.05%，碳酸钙1%，pH6.0；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，木醋杆菌种子液按以下方法制备：取出菌种保藏管，用木醋杆菌固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升木醋杆菌液体培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L木醋杆菌液体培养基的 5L大三角瓶中，30℃，150r/min震荡培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为木醋杆菌种子液接种，其中，所述木醋杆菌固体培养基：葡萄糖40.0，蛋白胨8，柠檬酸1.2，磷酸氢二钠1.0，磷酸二氢钠 2.0，硫酸镁0.3，琼脂18.0，去离子水1L，pH6.8，121℃灭菌20分钟；其中，所述的木醋杆菌液体培养基：葡萄糖20.0，蛋白胨4.0，柠檬酸2.0，磷酸二氢钠 2.7，硫酸镁0.25，去离子水1L，pH6.8，12l℃灭菌20分钟；其中，地衣芽孢杆菌种子液按以下方法制备：取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有2L 地衣芽孢杆菌液体培养基的5L大三角瓶中，37℃震荡培养20‑28小时，检测其菌液浓度，芽孢含量超过60亿CFU/ml，即可作为地衣芽孢杆菌种子液接种；其中所述LB固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；其中所述地衣芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10 g/L， 豆粕粉30 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，氯化钠2 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，青春双歧杆菌种子液按以下方法制备：取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种50毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养48小时，种子采用5%的接种量，接种至装有9.5L双歧杆菌培养基的 10L大三角瓶中，37℃厌氧培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过10亿CFU/ml，即可作为青春双歧杆菌种子液接种；其中，所述的双歧杆菌培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏5.0 g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5.0 g/L，柠檬酸二铵2.0 g/L，吐温‑80 1.0 ml/L，硫酸镁0.1 g/L，硫酸锌0.25 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g；培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，丁酸梭菌种子液按以下方法制备：取‑80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有9mLRCM培养基的试管中，37℃条件下静态厌氧活化48h，将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的10L丁酸梭菌种子培养基中，37℃条件下静态厌氧培养24h~36h，菌含量超过5亿CFU/ml，即可作为丁酸梭菌种子液接种；其中，所述的RCM培养基：胰蛋白陈10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5克/L，醋酸钠3g/L，pH7.0，121℃灭菌20min；其中，所述的丁酸梭菌种子培养基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L，半胱氨酸盐酸盐1g/L，NaHCO3 1g/L，CaCO3 1g/L，葡萄糖20g/L， PH7.0，121℃灭菌20min。