[发明专利]半自动样本处理液相色谱技术测定脂溶性维生素的方法

摘要

本发明公开了一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种脂溶性维生素的方法，采用HPLC方法，色谱条件为：流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.02％三氟乙酸的甲醇‑乙醇混合溶液，梯度洗脱；所述多种脂溶性维生素选自维生素A、D2、D3、α‑生育酚、β‑生育酚、γ‑生育酚、δ‑生育酚、K1、K2或Q₁₀。本发明通过对样本前处理方法和高效液相色谱条件的优化，建立了一种同时检测血清中多种脂溶性维生素的方法，可进行精确的定性和定量分析，是一种样本处理简单、快速、通量高、结果可靠、低成本的检测方法，具有特异性强，灵敏性高，操作简单，成本低等优点，结果客观易于分析，尤其适合临床普及应用。

主权项

1.一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于：采用HPLC方法，HPLC所用色谱柱为Waters XBridge C18；所述脂溶性维生素为维生素A、维生素D2、维生素D3、α‑生育酚、β‑生育酚、γ‑生育酚、δ‑生育酚、维生素K1、维生素K2与辅酶Q₁₀；所述血清进行以下前处理：将200ul血清样本置于半自动液液萃取仪中，先加入等体积的冷冻乙醇，涡旋2分钟，然后加入800ul冷冻的0.4g/L 2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的正己烷溶液，1500rpm涡旋10分钟，然后3000rpm离心20分钟，取上清液，离心后的沉淀部分加入800ul冷冻的0.4g/L 2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的正己烷溶液，1500rpm涡旋10分钟，然后3000rpm离心20分钟，合并上清液，氮气流上吹至近干，然后用100ul冷冻乙醇复溶涡旋60s,过0.2um滤膜，进样分析；色谱条件为：色谱柱：Waters XBridge C18 3.5um 4.6*250mm；柱温：35℃；进样体积：20μl；流速：0.75ml/min；切换波长如表1所示；梯度洗脱条件如表2所示；表1 波长切换参数时间，min波长，nm0325，维生素A6.5250，维生素D28.30265，维生素D310.0292，生育酚17.0248，维生素K119.5254，维生素K221.5275，辅酶Q1030.0325表2 梯度洗脱条件时间(分钟)A％B％0.015852.010904.05955.62988.3029812.559515.089218.0109023.0109025.0158530.01585                                                         。