[发明专利]一种重组枯草杆菌纤溶酶的分离纯化方法在审
申请号: | 201610783438.0 | 申请日: | 2016-08-31 |
公开(公告)号: | CN106148308A | 公开(公告)日: | 2016-11-23 |
发明(设计)人: | 王业富;董艳山;高丽;石毅;向好 | 申请(专利权)人: | 武汉真福医药股份有限公司 |
主分类号: | C12N9/68 | 分类号: | C12N9/68;C12Q1/34 |
代理公司: | 北京中北知识产权代理有限公司 11253 | 代理人: | 段秋玲 |
地址: | 430074 湖北省武汉市东湖技术开发区高新二*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明提供了一种重组枯草杆菌纤溶酶的分离纯化方法,包括以下步骤:疏水层析:选用苯基琼脂糖系列疏水填料填充层析柱,使用A液冲洗平衡层析柱,紫外吸收波长为280纳米进行检测,重组枯草杆菌纤溶酶的发酵液去除菌体后直接上样到疏水层析柱中,继续流加A液,直至流穿峰流穿完全,更换B液进行洗脱,直至与填料相结合的重组枯草杆菌纤溶酶被全部洗脱,得到高纯度的重组枯草杆菌纤溶酶液;本专利在枯草杆菌纤溶酶重组酵母发酵的基础上,在发酵培养液中建立了中试水平的枯草杆菌纤溶酶分离纯化方法,通过该方法可以大量获得高度纯化的纤溶酶,纯度可以达到95%。 | ||
搜索关键词: | 一种 重组 枯草杆菌 纤溶酶 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】:
一种重组枯草杆菌纤溶酶的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:1)疏水层析:选用苯基琼脂糖系列疏水填料填充层析柱,使用A液冲洗平衡层析柱,紫外吸收波长为280纳米进行检测,重组枯草杆菌纤溶酶的发酵液去除菌体后直接上样到疏水层析柱中,继续流加A液,直至流穿峰流穿完全,更换B液进行洗脱,直至与填料相结合的重组枯草杆菌纤溶酶被全部洗脱,得到高纯度的重组枯草杆菌纤溶酶液;2)脱盐层析:流动相缓冲液为B液,调节纯化设备的紫外吸收波长为280纳米,选用G25脱盐填料填充层析柱;流加一个柱体积等量的B液,将疏水层析中所得的纯化液上样到G25脱盐填料填充的层析柱中进行脱盐处理,收集流出的重组枯草杆菌纤溶酶蛋白峰,得到脱盐纯化液。
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