[发明专利]净化黑臭水体的复配菌剂及其制备方法

摘要

本发明提供一种净化黑臭水体的复配菌剂及其制备方法，复配菌剂包括以下组份：放线菌、枯草芽孢杆菌、硝化菌、乳酸菌、产阮假丝酵母菌和铜绿假单胞菌。各组份的重量配比为：2:2:2:1:1:1。优点为：可有效降解黑臭水体的COD含量、氨氮含量和磷酸盐含量，并且可以消除黑臭水体的臭味；同时加入去除氨氮菌种，可逐步提高水体透明度。

主权项

1.一种净化黑臭水体的复配菌剂的制备方法，其特征在于，净化黑臭水体的复配菌剂包括以下组份：放线菌、枯草芽孢杆菌、硝化菌、乳酸菌、产阮假丝酵母菌和铜绿假单胞菌；净化黑臭水体的复配菌剂的制备方法包括以下步骤：步骤1，根据目标菌株的特性，从污水处理厂的活性污泥中富集培养基，分别得到每种目标菌株所对应的目标菌株定向富集培养基；其中，所述目标菌株包括放线菌、枯草芽孢杆菌、硝化菌、乳酸菌、产阮假丝酵母菌和铜绿假单胞菌；将目标菌株接种到对应的目标菌株定向富集培养基中，进行定向富集培养；待其OD₆₀₀＝2时，停止富集培养，得到富集培养后的目标菌株；步骤2，制备得到每种目标菌株所对应的目标菌株筛选培养基；对步骤1富集培养后的目标菌株进行梯度稀释，分别稀释到10³倍、10⁵倍和10⁷倍；然后，采用目标菌株筛选培养基对相对应的稀释后的目标菌株进行筛选培养；步骤3，将经过步骤2筛选培养后的目标单菌落进行二次分离纯化，得到纯化后的目标单菌落；步骤4，对步骤3纯化后的目标单菌落进行定性检测实验，选呈阳性的目标菌株作为备选目标菌株；步骤5，采用相应的驯化培养基，对备选目标菌株进行驯化培养；步骤6，将驯化培养后的目标菌株进行液体发酵扩大培养；步骤7，将步骤6扩大培养后的目标菌株，按照配方比例进行复配，制备得到复配菌剂；步骤4具体为：步骤4.1，制备得到以下三类定性鉴定培养基：(a)产蛋白酶活性测定培养基：取质量分数为10～15％的脱脂牛奶，于110～113℃灭菌30min，与牛肉膏蛋白胨以质量比为1:8的比例混匀，按15～20g/L的质量分数加入琼脂，调pH为7.0～7.2，制成产蛋白酶活性测定培养基；(b)产淀粉酶活性测定培养基：取可溶性淀粉1～2g、蛋白胨3～6g、氯化钾0.5～1g、七水硫酸镁0.5～1g、琼脂15～20g，用水定容到1L，再调节pH为7.0～7.2，制成产淀粉酶活性测定培养基；(c)除氮定性测定培养基：取硝酸钾1～2g、柠檬酸钠5～7g、硫酸铵0.3～0.5g、磷酸氢二钾1～3g、磷酸二氢钾2～3g、七水硫酸镁0.1～0.2g、琼脂15～20g，用水定容到1L，再调节pH为7.0～7.2，制成除氮定性测定培养基；步骤4.2，对于步骤3纯化后的每种目标单菌落，分别采用产蛋白酶活性测定培养基、产淀粉酶活性测定培养基和除氮定性测定培养基对其进行定性检测，选择产蛋白酶活性和/或产淀粉酶活性和/或除氮活性呈阳性的目标菌株作为备选目标菌株；步骤7中，还包括：将步骤6扩大培养后的目标菌株，采用以下方法保存：针对枯草芽孢杆菌，铜绿假单胞菌，硝化菌和乳酸菌，采用硅藻土吸附的方法保存，即：首先将含有质量分数10～15％玉米粉和质量分数10～20％葡萄糖的硅藻土混合均匀，置于121℃高温灭菌30min，将其铺在固体发酵盘中；将固体发酵盘置于鼓风干燥箱中于30～35℃恒温烘干，得到干燥的吸附基材；然后，将目标菌株吸附到所述吸附基材中；针对产阮假丝酵母菌和放线菌，采用麦麸吸附的方法，即：首先将含有质量分数10～15％玉米粉和质量分数10～20％葡萄糖的麦麸混合均匀，置于121℃高温灭菌30min，将其铺在固体发酵盘中；将固体发酵盘置于鼓风干燥箱中于30～35℃恒温烘干，得到干燥的吸附基材；然后，将目标菌株吸附到所述吸附基材中；其中，步骤1中，各目标菌株所对应的定向富集培养基配比为：枯草芽孢杆菌、乳酸菌和铜绿假单胞菌所对应的定向富集培养基相同，均通过以下方法得到：将河道污水静置2～3天，取上清液，加入蛋白胨8～10g、牛肉膏1～3g和氯化钠20～30g，用水定容到1L；放线菌所对应的定向富集培养基为：加入可溶性淀粉15～20g、磷酸氢二钾0.5～1g、氯化钠0.5～1g、硫酸镁0.2～0.5g、硝酸钾1～2g、硫酸亚铁0.01～0.03g，用水定容到1L，再调节pH为7.2～7.4；产阮假丝酵母菌所对应的定向富集培养基为：加入葡萄糖80～100g、蛋白胨5～10g、酵母膏10g、磷酸二氢钾1～2g、硫酸镁0.2～0.5g，用水定容到1L，再调节pH为4.0～6.5；硝化菌所对应的定向富集培养基为：加入蛋白胨10～15g、氯化钠5～7g、牛肉膏3～5g、硝酸钾1～2g，用水定容到1L，再调节pH为7.0～7.5；其中，步骤2中，各种目标菌株所对应的目标菌株筛选培养基配比为：枯草芽孢杆菌、乳酸菌和铜绿假单胞菌的筛选培养基相同，均为：加入葡萄糖50～60g、氯化铵0.5～1g和酵母膏10g，用水定容到1L，再调节pH为7.0～7.5；放线菌筛选培养基为：加入可溶性淀粉20～25g、磷酸氢二钾1～1.5g、氯化钠0.5～1g、硫酸镁0.2～0.3g、硝酸钾0.5～1g、硫酸亚铁0.01～0.03g、琼脂15～20g，用水定容到1L，再调节pH为7.2～7.4；此外，每1放线菌筛选培养基中再加入质量分数为3％的重铬酸钾1.5mL，抑制细菌和霉菌的干扰；产阮假丝酵母菌筛选培养基为：称马铃薯180～200g，加入1L自来水煮沸30min，过滤除去残渣后，定容到1L，加入葡萄糖20～25g、乳酸5～6mL、琼脂15～20g，调节pH为4.0～6.5，从而抑制其它杂菌的生长；硝化菌筛选培养基：加入琥珀酸钠8～10g、L‑天冬酰胺酸1～1.5g、硝酸钠0.5～1g、磷酸二氢钾1～2g、氯化亚铁0.02～0.05g、氯化钙0.2～0.3g、硫酸镁1～2g、BTB溶液1mL，其中BTB溶液中含1％乙醇，以及琼脂15～20g，用水定容到1L，再调节pH为7.0～7.3；其中，BTB溶液指：BTB按照1％的体积分数溶解在乙醇中，取称量1ml；其中，步骤5具体为：步骤5.1，制备得到以下三类驯化培养基：(a)除氮驯化培养基：取硝酸钾1～2g、柠檬酸钠5～7g、硫酸铵0.3～0.5g、磷酸氢二钾1～3g、磷酸二氢钾2～3g、七水硫酸镁0.1～0.2g，搅拌混合，用水定容到1L；(b)产蛋白酶活性驯化培养基：配置质量分数为10～15％的脱脂牛奶，加入稀释的10倍体积的牛肉膏蛋白胨牛肉膏培养基中，牛奶与牛肉膏培养基质量比例为1：1，调解pH为7.2～7.4；(c)产淀粉酶活性驯化培养基：取可溶性淀粉1～5g、蛋白胨10～15g、氯化钾0.1～1g和硫酸镁0.2～0.5g，用水定容到1L，调解pH为7.2～7.4；步骤5.2，对产蛋白酶活性呈阳性的目标菌株，采用产蛋白酶活性驯化培养基对目标菌株进行驯化培养；对产淀粉酶活性呈阳性的目标菌株，采用产淀粉酶活性驯化培养基对目标菌株进行驯化培养；对除氮活性呈阳性的目标菌株，采用除氮驯化培养基对目标菌株进行驯化培养；其中，各组份的重量配比为：2:2:2:1:1:1。