[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的制备方法

摘要

本发明涉及生化技术领域，公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的制备方法。该方法包含以下步骤：中空聚苯乙烯微球的活化、抗体的偶联、微球的封闭、洗涤、溶解。本发明中的实施方式中，通过在中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(简称：NGAL)试剂中使用中空聚苯乙烯微球，即通过在纳米SiO₂内核上合成聚苯乙烯微球，再通过氢氟酸去除纳米SiO₂内核，从而形成了中空的聚苯乙烯微球，降低了聚苯乙烯微球的密度，从而能够使微球更好的悬浮在溶液中，提高了试剂的稳定性，从而增强了检测试剂的检测灵敏度，有利于NGAL试剂的大批量稳定生产，具有重要的实际应用价值。

主权项

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：中空聚苯乙烯微球的活化：向中空聚苯乙烯微球中加入第一缓冲液进行稀释后，加入N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，搅拌、混合均匀，在所述搅拌的过程中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，继续搅拌、洗涤后，溶解到所述第一缓冲液中，即得活化的中空聚苯乙烯微球溶液；抗体的偶联：向所述活化的中空聚苯乙烯微球溶液中加入中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体溶液，震荡反应后，即得第一混合液；微球的封闭：向所述第一混合液中加入牛血清白蛋白，震荡反应，即得第二混合液；洗涤、溶解：将所述第二混合液经过离心、超声洗涤后溶解到第二缓冲液中，即得中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒；其中，所述中空聚苯乙烯微球制备方法包含以下步骤：将硫酸锰和三氯化铁混合加入溶液中，搅拌均匀，加入氢氧化钠，调整温度反应1～2h得到铁酸锰；加入油酸，反应2～3h，得到油酸修饰的铁酸锰；取二氧化硅、十二烷基硫酸钠、苯乙烯、过硫酸钾溶于去离子水中，搅拌均匀；加入所述油酸修饰的铁酸锰，调整温度，反应1～3h后加入丙稀酸，继续搅拌3～7h；然后加入氢氟酸，维持搅拌1～3h，即得中空聚苯乙烯微球；或者所述中空聚苯乙烯微球制备方法包含以下步骤：将硫酸锰和三氯化铁混合加入溶液中，搅拌均匀，加入氢氧化钠，调整温度反应1～2h得到铁酸锰；加入油酸，反应2～3h，得到油酸修饰的铁酸锰；取二氧化硅、十二烷基硫酸钠、苯乙烯、过硫酸钾溶于去离子水中，搅拌均匀；加入所述油酸修饰的铁酸锰，调整温度，加入氢氟酸，维持搅拌1～3h，再加入丙稀酸，继续搅拌3～7h；即得中空聚苯乙烯微球；所述中空聚苯乙烯微球制备方法中，所述二氧化硅的粒径为30～80nm。