[发明专利]NK细胞的制备方法

摘要

本申请提供了NK细胞的制备方法，所述方法包括接种单个核细胞、第一次至第五扩增。利用所述方法，成本低，且所制备的NK细胞纯度高、扩增率高。

主权项

1.一种制备NK细胞的方法，所述方法包括：1)接种单个核细胞，包括以0.5×10⁶个/ml至2×10⁶个/ml的密度将单个核细胞接种至含接种培养基的2‑5μ g/ml的人源化CD16单抗和2‑5μ g/ml的人源化CD3单抗包被的细胞培养瓶中，所述接种培养基含有2000至5000IU/ml IL‑2、500至3000IU/ml IFN‑γ、20‑50ng/ml IL‑7、20‑50ng/ml IL‑15和2‑5％的自体灭活血浆或同血型的灭活血清；2)第一次扩增，包括在培养的第2至第3天，向细胞中补加2倍体积的第一扩增培养基，其包含2‑5％的自体灭活血浆或同血型灭活血浆、20‑100μ g/ml OK‑432、20‑50ng/ml IL‑15和20‑50ng/ml IL‑12；3)第二次扩增，包括在培养的第4至第5天，向细胞中补加7倍体积的第二扩增培养基，其包含2‑5％的自体灭活血浆或同血型灭活血浆、20‑100μ g/ml OK‑432、20‑50ng/ml IL‑15和20‑50ng/ml IL‑12；4)第三次扩增，包括在培养的第7至第8天，向细胞中补加20倍体积的第三扩增培养基，其包含2‑5％的自体灭活血浆或同血型灭活血浆、500‑2000IU/ml IL‑2、20‑50ng/ml IL‑21和20‑50ng/ml IL‑18；5)第四次扩增，包括在培养的第9至10天，向细胞中补加30倍体积的第四扩增培养基，其包含500‑2000IU/ml IL‑2；6)第五次扩增，包括在培养的第12至14天，向细胞中补加20倍体积的第五扩增培养基，其包含500‑2000IU/ml IL‑2。