[发明专利]铁皮石斛组培工厂化育苗方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛组培工厂化育苗方法，涉及生物技术领域，该铁皮石斛组培工厂化育苗方法通过简单易行的方法对田间杂乱种质进行筛选，筛选出高产、抗病、外观、口感良好且质量符合中国药典标准的铁皮石斛茎段，极大的缩短了品种筛选时间；培养过程中MS培养基中大量元素的改良、添加物中增加黄腐酸钙和新型食品抗氧化剂异抗坏血酸钠或抗坏血酸钙、培养条件使用色温4000K的led光源的照明、以及在生产壮苗过程中循环转接一定规格的小苗，提高了组培苗的生长速度，减少了生产过程中小苗褐化、黄化、生长不良的状况和组培苗的周转次数，从而提高了工厂化生产效率。

主权项

一种铁皮石斛组培工厂化育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)种源筛选：石斛生长旺季6～9月份对外观少病虫害，生长健壮的单丛种苗进行逐一标记，采集前每月喷施三次EM菌、黄腐酸钙和芸苔素，采收季节11～3月对所标记封顶成熟的种苗进行中国药典相应理化指标作全检，对符合药典标准的种苗进行茎段采集；(2)外植体预处理：将石斛鲜条茎段放入加入适量洗洁精的35～45℃温水中浸泡30～60分钟，将浸泡好的石斛茎段的叶鞘剥掉不能伤及节上潜伏芽，叶鞘剥掉的茎段切成每一节一个段，用异抗坏血酸钠或抗坏血酸钙50～200mg/L浸泡30～60分钟，然后用清水清洗吸水纸吸干表面水分待用；(3)外植体灭菌：将茎段用75％酒精浸10～15秒，立即放入0.1％升汞中8～12分钟，并不时轻晃，最后取出茎段用无菌水清洗4～5次，再用无菌吸水纸吸干表面水分待用；(4)茎段腋芽诱导：将切好茎段接入改良1号培养基内暗培养10～15天，腋芽开始萌动，之后使用色温4000K LED照明灯光照8～10小时/天，光照强度1000～1200lex，温度23～26℃；(5)丛芽诱导：待腋芽长到0.5～1cm时，切下芽体放入含有异抗坏血酸钠或抗坏血酸钙50～200mg/L无菌水中浸泡20～30分钟，每5分钟摇晃一次，每次一分钟，然后用无菌吸水纸吸干表面水分转入改良2号培养基中培养40～50天即可出现小丛芽。培养条件：使用色温4000K LED照明灯光照10～12小时/天，光照强度1800～2000lex，温度23～26℃；(6)丛芽增殖：将丛芽转入改良3号培养基中培养40～50天，丛芽几乎增殖长满整个接种瓶。培养条件：使用色温4000K LED照明灯光照10～12小时/天，光照强度1800～2000lex，温度23～26℃；(7)壮苗：将高0.3cm以上的丛芽接入改良4号培养基中培养50～60天，瓶内1.5cm以上小苗和1.5cm以下的小苗比例在7∶3～5∶5之间，将1.5cm以下小苗循环转入改良4号培养基中即可实现周年保持一定数量的生产。培养条件：使用色温4000K LED照明灯光照10～12小时/天，光照强度1800～2000lex，温度23～26℃；(8)生根出苗：将高1.5cm以上小苗接入改良5号培养基中培养80～90天，苗平均高度4～5cm，根系发达、叶色浓厚即可开瓶驯化。培养条件：使用色温4000K LED照明灯光照12～14小时/天，光照强度2000～2500lex，温度23～26℃。