[发明专利]用于高通量测序的DNA文库构建方法有效
| 申请号： | 201610807018.1 | 申请日： | 2016-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN106350590B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 王旭;钟嘉泳;张弓;董鸣;余卓 | 申请（专利权）人： | 承启医学(深圳)科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 11597 北京睿派知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘锋 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种扩增子测序文库的构建方法，包括用多对融合引物对从待测样品获得的DNA模板进行多重PCR，回收PCR产物，得到测序文库；其中所述多对融合引物分别针对DNA模板上的不同目的片段，融合引物包含针对目的片段的特异性引物序列和测序接头序列；其中多重PCR按下述反应条件进行：95℃2min；38个循环，每个循环为95℃30s，然后从76℃到55℃和58℃之间的任意温度缓慢降温，每秒降0.1℃，待降至58℃后保持20s，然后72℃30s；72℃2min，4℃保持。本发明还公开了该文库构建方法在高通量测序检测STR基因座和亲权鉴定中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 通量 dna 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种扩增子测序文库的构建方法，包括用多对融合引物对从待测样品获得的DNA模板进行多重PCR，回收PCR产物，得到测序文库；/n其中所述多对融合引物分别针对DNA模板上的不同目的片段，每对融合引物从5'端到3'端依次包含测序接头序列和针对目的片段的特异性引物序列；/n其中多重PCR按下述反应条件进行：95℃2min；38个循环，每个循环为95℃30s，然后从76℃到55℃和58℃之间的任意温度缓慢降温，每秒降0.1℃，待降至目的温度后保持20s，然后72℃30s；72℃2min；/n其中，融合引物中所包含的测序接头序列为：上游引物中5'-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-3'，下游引物中5'-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-index序列-GAT-3'；或者/n融合引物中所包含的测序接头序列为：上游引物中5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-第一index序列-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3'，下游引物中5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT+ 第二index序列+ GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3'；/n其中第一index序列与第二index序列是不同的index序列；/n其中，所述index序列用于标识不同的DNA模板，便于将不同样品混合测序。/n
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