[发明专利]一种基于ddPCR的高灵敏EBVDNA定量检测试剂盒及使用方法

摘要

本发明提供一种基于ddPCR的高灵敏EBV DNA定量检测试剂盒及使用方法，试剂盒包括DNA抽提缓冲液、PCR引物及探针、PCR反应液和EBV阴、阳性对照。使用本发明提供的试剂盒进行ddPCR检测时，能有效排除PCR设备、标准品等影响，进而实现高灵敏绝对定量。本发明提供的EBV DNA定量检测试剂盒通过ddPCR技术能够对血清、血浆中的EBV进行高灵敏精确定量，为EBV相关疾病的诊断和疗效监测提供参考依据。本发明还通过ddPCR确立EBV DNA国际标准物质的国际单位与常用单位之间的函数关系为1IU/ml=2.5Copy/ml,实现EBV DNA国际溯源，实现检测结果和定量单位的国际可比性。

主权项

一种基于ddPCR的高灵敏EBV DNA定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括DNA抽提缓冲液、PCR引物及探针、PCR反应液和EBV阴、阳性对照，其中，所述DNA抽提缓冲液包括蛋白酶K缓冲液、buffer1、buffer2、buffer3和buffer4；所述buffer1包括Tris‑HCl、EDTA和盐酸胍；所述buffer2包括异丙醇、Tris‑HCl和EDTA；所述buffer3和buffer4分别包括浓度均不同的无水乙醇、Tris‑HCl和EDTA；所述PCR反应液包括5×PCR反应缓冲液，0.8‑1.2mmol/L脱氧核糖核苷三磷酸，1‑7U/μl H‑Taq DNA聚合酶；所述PCR引物及探针包括700nmol/L‑1.0μmol/L用于扩增靶多核苷酸的上下游引物和0.2mol/L‑0.5μmol/L用于检测靶多核苷酸的探针；所述用于检测靶多核苷酸的探针的碱基对序列为：5’FAM‑CACACACTACACACACCCACCCGTCTC‑BHQ1 3’。