[发明专利]一种基于增强拉曼光谱效应检测双酚A的方法

摘要

本发明公开了一种基于增强拉曼光谱效应检测双酚A的方法，包括以下步骤：(1)设计与合成相应的寡核苷酸片段；(2)金纳米星的合成；(3)金纳米星二聚体的组装；(4)实际添加样品的测定；本发明设计两段具有部分互补序列的DNA，将其分别修饰在金纳米星上，使得金纳米星通过碱基互补形成二聚体，然而在BPA会与其中的一条DNA互补结合，使得金纳米星二聚体分离，导致拉曼光谱的变化，同时在拉曼探针分子4‑氨基苯硫酚(4‑ATP)的作用下，体系所产生的拉曼信号的变化较为显著，通过检测信号的变化强度实现对BPA的简单、快速、灵敏检测。

主权项

一种基于增强拉曼光谱效应检测双酚A的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)设计与合成相应的寡核苷酸片段：设计一段能够对双酚A特异性识别且具有双酚A竞争性结合配子作用的DNA1；制备合成具有巯基修饰的DNA2，DNA1和DNA2序列：DNA1：5′‑SH‑(T)10‑CCGGT GGGTG GTCAG GTGGG ATAGC GTTCC GCGTA TGGCC CAGCG CATCA CGGGT TCGCA CCA‑3DNA2：5′‑SH‑(T)10‑CCCAC CTGAC CACCC ACCGG‑3′(2)采用种子生长法合成金纳米星：a、首先，将1mM的氯金酸溶液煮沸，加入1％的柠檬酸溶液并不断的剧烈搅拌，冷却至室温即得到金种溶液，氯金酸溶液与柠檬酸溶液的体积比为20:3；b、其次，将硝酸银溶液和0.1M的抗坏血酸溶液混合均匀，快速加入到已包金种的0.25mM的氯金酸溶液中，调节pH值为3；硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的体积比为2:1，硝酸银溶液和氯金酸溶液的体积比为1:100，金种和氯金酸溶液的体积比为1:100；c、反应液在3000rpm下离心15min，重悬于0.05％的吐温20中；(3)金纳米星二聚体的组装：a、将上述制备的金纳米星溶液和100μM的DNA1溶液在反应室温下反应3h，然后加入2M的氯化钠溶液至终浓度为0.05M，混合均匀，并载不断的摇晃下反应12h，金纳米星溶液与DNA1溶液的体积比为50:1；b、将上述制备的金纳米星溶液和100μM的DNA2溶液在反应室温下反应3h，然后加入2M的氯化钠溶液至终浓度为0.05M，混合均匀，并载不断的摇晃下反应12h，金纳米星溶液与DNA2溶液的体积比为50:1；c、上述反应液分别在3000rpm离心10min，去除未偶联上的DNA，将混合液分别命名为GNS‑DNA1和GNS‑DNA2；d、将50nm GNS‑DNA1和50nm GNS‑DNA2按照1:1的体积混合，然后加入4‑ATP溶液至终浓度为1μM，室温下孵育过夜，离心重悬在超纯水中；(4)向上述金纳米星二聚体的组装溶液中加入样品混合并在室温下反应30分钟，通过拉曼光谱法测定双酚A离子。