[发明专利]高通量检测STR遗传标记的建库试剂盒

摘要

本发明提供高通量检测STR遗传标记的建库试剂盒，其中包括多对用于扩增目的STR基因座的融合引物，每对融合引物分别针对DNA模板上的不同STR基因座，每对融合引物从5'端到3'端依次包含测序接头序列和针对STR基因座的特异性引物序列。利用该试剂盒可以通过一次扩增实现STR基因座扩增子测序文库的构建，简化建库的操作过程，降低建库的时间和成本，同时不影响测序质量。

主权项

1.高通量检测STR遗传标记的建库试剂盒，其中包括多对用于扩增目的STR基因座的融合引物，每对融合引物分别针对DNA模板上的不同STR基因座，每对融合引物从5'端到3'端依次包含测序接头序列和针对STR基因座的特异性引物序列；/n其中所述不同STR基因座由下述STR基因座组成：/nCSF1PO GenBank X14720、FGA GenBank M64982、TH01 GenBank D00269、TPOX GenBankM68651、D3S1358 NT_005997positions 754983-755121、D5S818 GenBankAC008512、D7S820GenBank AC004848、D8S1179 GenBank AF216671、D13S317 GenBankAL353628、D16S539GenBank AC024591、D18S51 GenBank AP001534、D21S11 GenBankAP000433、D2S1338GenBank AC010136、CD4 Genbank M86525、D12S391 GenbankM08921、PLA2A1 GenbankM22970和FABP Genbank M18079；/n其中针对各个STR基因座的特异性引物序列包括如下所示的特异性正向引物序列和反向引物序列：/nCSF1PO：正向5'-3'：TAGCAGGTTGCTAACCACCC，反向5'-3'：TCAGACCCTGTTCTAAGTACTTC；/nFGA：正向5'-3'：CCCATAGGTTTTGAACTCACAG，反向5'-3'：GTGATTTGTCTGTAATTGCCAGC；/nTH01：正向5'-3'：GGGCAAAATTCAAAGGGTATCTG，反向5'-3'：TGCAGGTCACAGGGAACAC；/nTPOX：正向5'-3'：AGGCACTTAGGGAACCCTC，反向5'-3'：TCCTTGTCAGCGTTTATTTGCC；/nD3S1358：正向5'-3'：CAAGACCCTGTCTCATAGATAG，反向5'-3'：TCAACAGAGGCTTGCATGTATC；/nD5S818：正向5'-3'：GTGACAAGGGTGATTTTCCTCTT，反向5'-3'：GTGATTCCAATCATAGCCACAG；/nD7S820：正向5'-3'：GGTCAGGCTGACTATGGAG，反向5'-3'：TCCTCATTGACAGAATTGCACC；/nD8S1179：正向5'-3'：TCTTTTTGCCCACACGGCC，反向5'-3'：CTGTAGATTATTTTCACTGTGGGG；/nD13S317：正向5'-3'：ATTTCTTTAGTGGGCATCCGTG，反向5'-3'：CCTTCAACTTGGGTTGAGCC；/nD16S539：正向5'-3'：CAGATCCCAAGCTCTTCCTC，反向5'-3'：GCATGTATCTATCATCCATCTCTG；/nD18S51：正向5'-3'：CACTTCACTCTGAGTGACAAATTG，反向5'-3'：GTGTGGAGATGTCTTACAATAACAG；/nD21S11：正向5'-3'：TCAATTCCCCAAGTGAATTGCC，反向5'-3'：TGTTCTCCAGAGACAGACTAATAG；/nD2S1338：正向5'-3'：GTGGATTTGGAAACAGAAATGGC，反向5'-3'：GTGGCCCATAATCATGAGTTATTC；/nCD4：正向5'-3'：AGGGGTACTTGTGTTAATTGTTGG，反向5'-3'：GCGTTTTCCAGTCTGAAAAAAGTG；/nD12S391：正向5'-3'：GAATCAACAGGATCAATGGATGC，反向5'-3'：CCTCCATATCACTTGAGCTAATTC；/nFABP：正向5'-3'：TTGTAAGCTCCATGAGGTTAGAG，反向5'-3'：AGCCTCCCTAGGTCAGATAG；/nPLA2A1：正向5'-3'：TAGTATCAGTTTCATAGGGTCACC，反向5'-3'：AGTTCGTTTCCATTGTCTGTCC；/n其中测序接头序列是：上游引物中5'-CCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT-3'，下游引物中5'-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-CTAAGGTAA-CGAT-3′；/n其中融合引物由五种融合引物混合物组成，它们分别是：/n包含1.5μM针对TPOX基因座的融合引物和3.5μM针对D18S51基因座的融合引物的混合物；/n包含1.5μM针对D8S1179基因座的融合引物和3.5μM针对D21S11基因座的融合引物的混合物；/n包含1μM针对CSF1PO基因座的融合引物、2μM针对D3S1358基因座的融合引物、1μM针对D13S317基因座的融合引物和1μM针对D12S391基因座的融合引物的混合物；/n包含1μM针对FGA基因座的融合引物、1.5μM针对TH01基因座的融合引物、1.5μM针对D5S818基因座的融合引物和1μM针对PLA2A1基因座的融合引物的混合物；和/n包含1μM针对D7S820基因座的融合引物、1μM针对D16S539基因座的融合引物、1μM针对D2S1338基因座的融合引物、1μM针对CD4基因座的融合引物和1μMFABP引物的混合物。/n