[发明专利]一种根癌农杆菌介导的番茄转化方法

摘要

本发明提供了一种根癌农杆菌介导的番茄转化方法，子叶外植体（苗龄8天）在玉米素2.0 mg/L、IAA 0.1mg/L的MSB5培养基预培养1天后，用EHA105农杆菌侵染20min，浓度为OD600=0.2~0.6，在共培养基上培养3天后，在500mg/L头孢霉素的培养基上共培养1天后，在含有100mg/L的卡那霉素和500mg/L的羧苄青霉素的培养基筛选6‑8周。该方法转化效率发高，不用饲养层细胞、乙酰丁香酮、伤流液，转化效率达20%以上，简单、可重复性强。

主权项

一种根癌农杆菌介导的番茄转化方法，其特征在于：所述方法包括如下：（1）种子消毒和培养选取饱满、大小一致、新鲜的番茄种子用清水浸泡2h，经消毒后用无菌水冲洗3‑5次，将种子接种到培养基A中培养； （2）子叶外植体的的获得选取8天苗龄的番茄子叶，接种在培养基B上，暗培养1d后用于转化；（3）转化将外植体接入EHA105农杆菌悬浮液中，浸染20min，使农杆菌吸附到外植体上，悬浮液浓度为OD₆₀₀ =0.2~0.6；将感染后的外植体移至灭菌滤纸上，吸去表面液体后转入固体共培养培养基C上，28℃下进行共培养3天，取出共培养后的外植体，转入培养基D筛选，每3周继代培养1次，6‑8周后转入培养基E培养；（4）诱导生根丛生芽生长至2‑4 cm时，取生长状况良好的不定芽接种于生根培养基中培养，培养20‑25d的正常试管苗；（5）移栽将试管苗在自然光下培养3 ‑4d 后，打开瓶盖，炼苗2d ，然后取出幼苗，洗尽琼脂，除去部分叶片和较长的根，移入由泥炭土：蛭石质量比=l：1配置的营养土中，盖薄膜保温保湿培养。