[发明专利]一种羊胎盘抗氧化多肽及其酶解制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种羊胎盘抗氧化多肽及其酶解制备方法与应用，以羊胎盘下脚料为原料，通过木瓜蛋白酶酶解，再经过大孔吸附树脂、超滤膜、葡聚糖凝胶色谱和半制备RP‑HPLC反相高效液相色谱进行分离纯化，收集后冷冻干燥，得到高抗氧化活性的羊胎盘多肽，其氨基酸序列为：Glu‑Pro‑Val‑Ser‑His‑Phe。采用本发明的方法能有效利用羊胎盘加工的废弃物，提高附加值，增加经济效益，且具有产品活性高、制备过程方便可行、环保等优点，通过本发明的方法能够获得具有高抗氧化活性的天然多肽，可替代人工合成的抗氧化剂使用，例如作为抗衰老化妆品中的功能原料，制成乳液、晚霜、眼霜、凝露、精华素、面膜等。

主权项

1.一种羊胎盘抗氧化多肽的酶解制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)原料选择与酶解：选择羊胎盘下脚料为原料，采用木瓜蛋白酶对其进行酶解；酶解条件为：底物质量浓度为15～50mg/mL、pH为6.0～8.0、酶解温度为40～60℃、加酶量为2000～6000U/g、酶解时间为50～150min；(2)除糖脱盐处理：将步骤(1)中获得的酶解产物通过大孔吸附树脂，选择20～60％的乙醇水溶液作为洗脱液；大孔吸附树脂为DA201‑B型、DA201‑C型或者DA201‑D型大孔吸附树脂，所述洗脱液为50％的乙醇水溶液，流速为3mL/min；(3)超滤分离：将步骤(2)中的洗脱液富集，浓缩后采用截留分子量为1～100KDa的超滤膜进行分离；(4)色谱分离：收集步骤(3)中的透过液，经过Sephadex G‑10型葡聚糖凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，洗脱速度为0.4～0.6mL/min，洗脱峰在220nm下进行测量；(5)再次分离：富集步骤(4)中的高活性洗脱液，利用半制备RP‑HPLC反相高效液相色谱进一步分离，选择8～12％的乙腈水溶液作为洗脱液，流速为1.5～2.5mL/min；富集高活性洗脱液为富集Sephadex G‑10型葡聚糖凝胶色谱柱中的第2个吸收峰的洗脱组分；(6)收集步骤(5)中得到的高活性洗脱液，冷冻干燥，得到羊胎盘抗氧化多肽；所述羊胎盘抗氧化多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；收集高活性洗脱液为收集半制备RP‑HPLC反相高效液相色谱柱中的第2个吸收峰的洗脱组分。