[发明专利]一种怀集报春苣苔组织培养和快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种怀集报春苣苔组织培养和快速繁殖方法。本发明以怀集报春苣苔肥嫩叶片为外植体，在不定芽的诱导、丛生芽繁殖、壮苗生根和移栽等各阶段，选择适合怀集报春苣苔丛生芽诱导、繁殖、生根、移栽等各培养阶段的培养基配方和培养条件，实现怀集报春苣苔种苗的组织培养和快速繁殖，可在较短时间内繁育出大量优质种苗，其具有遗传稳定性高，出苗快，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好等特点，为满足该物种的迁地保育与引种回归研究和资源开发利用提供优质种苗，实现怀集报春苣苔的资源保护和可持续利用。

主权项

1.一种怀集报春苣苔组织培养和快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a.外植体的消毒和初代诱导培养：取怀集报春苣苔叶片为外植体，清洗消毒后，将叶片切成0.5～1.0cm×1.0～2.0cm小块，接种于初代诱导培养基上培养，诱导芽的形成，得到萌发幼芽的愈伤组织；所述的初代诱导培养基为：每升含有6‑BA0.5～1.5mg、NAA 0.05～0.5mg、蔗糖30g、琼脂6g，余量为MS培养基，pH为6.5；所述的清洗消毒，是将叶片用洗洁精漂洗20min，流水冲洗30min，然后在超净工作台上用体积分数75％乙醇溶液浸泡30s，质量分数0.1％HgCl2溶液消毒4～5min，用无菌水漂洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面水分；b.芽的诱导和继代增殖：将萌发幼芽的愈伤组织切割成只带3～4个芽的小块，接种于增殖培养基上培养，诱导丛生芽的形成，得到继代培养苗；所述的增殖培养基为：每升含有6‑BA 0.1～0.5mg、NAA 0.05～0.5mg、蔗糖30g、琼脂6g，余量为MS培养基，pH为6.5；c.壮苗和生根培养：待继代培养苗长到3～4个叶片时，将继代培养苗切分出来接种到壮苗培养基上培养壮苗，然后转入生根培养基上培养，得到生根苗；所述的壮苗培养基为：每升含有活性炭0～2g、蔗糖30g、琼脂6g，余量为MS培养基，pH为6.5；所述的生根培养基为：每升含有NAA 0.1～0.5mg、活性炭0～2g、蔗糖30g、琼脂6g，余量为1/2MS培养基，pH为6.5；d.试管苗移栽：当生根苗长至7‑8片叶子时，进行炼苗，然后洗掉生根苗根部培养基，栽入移栽基质中，置于遮阴、湿润的环境下培养；所述的移栽基质是将泥炭土和珍珠岩按体积比2:1混合均匀得到的；所述的步骤a、b和c的培养条件均为：温度25±2℃、光照强度1500lx、光照时间12h/d。