[发明专利]一种与花椰菜花球毛花性状连锁的SNP位点及其检测方法和引物组

摘要

本发明属于蔬菜分子生物技术领域，具体涉及与花椰菜花球毛花性状连锁的SNP位点及其检测方法和引物组。本发明所述的SNP位点与花椰菜花球毛花表型连锁，结合该SNP位点的检测方法，可通过基因型检测对花椰菜材料的毛花性状进行辅助选择。该发明具有特异性强，检测方便，费用低廉等优点，可明显缩短育种周期，提高效率。

主权项

1.一种与花椰菜花球毛花性状连锁的SNP位点的检测方法，对应的花球性状为耐毛花，该SNP位点及其侧翼序列为5’‑CCAAAACAAAAGTGCAAAATCTTATATATGCGCGCGGCTTGTATGTATTTATGTGATTTTTTCAAATGTAAACGTGTTTA‑3’；对应的花球性状为易毛花，该SNP位点及其侧翼序列为5’‑CCAAAACAAAAGTGCAAAATCTTATATATGCACGCGGCTTGTATGTATTTATGTGATTTTTTCAAATGTAAACGTGTTTA‑3’；其特征在于，该方法包括以下步骤：1）待检测花椰菜基因组DNA提取：将待检测花椰菜材料按照常规CTAB方法分别提取基因组DNA，‑20℃保存，备用；2）待检测样品基因组DNA的PCR扩增：利用特异引物对待检测样品的基因组DNA分别进行PCR扩增，特异引物中上游引物：5’‑ CCAAAACAAAAGTGCAAAATCT ‑3’;下游引物:5'‑ AAGGCCCTATTGGTA ACTTG ‑3’；反应总体积20μL，具体体系如下：2.5 mmol/L上述引物，0.2 mmol/L dNTPs，1 U Taq酶，2mmol/L MgCl₂，1×扩增缓冲液，基因组DNA 50 ng，加dd H₂O至20μL；热循环程序为：94℃预变性2 min，1个循环；94℃变性1min，55℃复性30 s，72℃延伸45 s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存；3）PCR产物的酶切反应及电泳检测：将2）中的PCR产物利用限制性内切酶BsePI在50℃条件下酶切3 h，酶切体系含 PCR 产物 7μL， 10×buffer 1μL，1 U BsePI 酶，加dd H₂O至10μL；酶切后将其产物在1.2% 琼脂糖凝胶上进行电泳分离，溴乙锭显色；4）待检测样品基因型的鉴定：依据3）中凝胶条带模式，显示160 bp的样品为含有易毛花基因型的材料，对应的花球性状为易毛花；而显示128 bp的样品则为含有耐毛花基因型的材料；对应的花球性状为耐毛花。