[发明专利]一种花椰菜花球花梗长度的分子标记辅助选择方法

摘要

本发明属于蔬菜分子育种技术领域，尤其涉及利用分子标记对花椰菜花梗长度性状进行辅助选择的方法。一种花椰菜花球花梗长度的分子标记辅助选择方法，该方法包括：（1）待检测材料准备；（2）待检测样品基因组DNA的PCR扩增；（3）PCR产物的酶切反应及电泳检测；（4）待检测样品花球花梗长度的鉴定与筛选。本发明为长花梗花椰菜品种选育提供了简便、高效、稳定的辅助选择方法。

主权项

1.一种花椰菜花球花梗长度的分子标记辅助选择方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：1）待检测材料准备：将待检测的花椰菜材料按照常规方法播种、育苗，并分单株编号；于2‑3片真叶期取各单株叶片按照常规CTAB方法分别提取基因组DNA，‑20℃保存，备用；2）待检测样品基因组DNA的PCR扩增：利用特异引物组合对待检测样品的基因组DNA分别进行PCR扩增，特异引物组合中上游引物：5’‑ CAAATTTGTTTCGAAGTGATTCT ‑3’;下游引物 :5'‑ TGGATGGAGTTCA A ATCTTTT ‑3’；反应总体积20μL，具体体系如下：2.5 mmol/L上述引 物，0.2 mmol/L dNTPs，1 U Taq酶，2mmol/L MgCl₂，1×扩增缓冲液，基因组DNA 50 ng，加 dd H₂O至20μL；热循环程序为：94℃预变性2 min，1个循环；94℃变性1min，55℃复性30 s，72℃延伸45 s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存；3）PCR产物的酶切反应及电泳检测：将2）中的PCR产物利用限制性内切酶Mae I在37℃ 条件下酶切3 h，酶切体系含 PCR 产物 7μL， 10×buffer 1μL，1 U Mae I，加dd H₂O至10μ L；酶切后将其产物在1.2% 琼脂糖凝胶上进行电泳分离，溴乙锭显色；4）待检测样品花球花梗长度的鉴定与筛选：依据3）中凝胶条带模式，显示为169bp的样 品视为含有长花梗位点基因型的材料予以保留，而显示为135bp的样品则视为不含长花梗 位点基因型的材料予以剔除；将入选幼苗定植于大田，按照常规花椰菜栽培措施进行田间 管理；花球成熟时用游标卡尺测量花球最下部4个不同分枝方向的花梗长度，取平均值作为 该株的花梗长度值，淘汰其中花梗长度达不到预期值的短花梗植株。