[发明专利]基于苯胺沉积的电化学传感电极定量检测8-OhdG活性的方法

摘要

本发明公开基于苯胺沉积的电化学传感电极定量检测8‑OhdG活性的方法，包括以下步骤：带有巯基的DNA四面体结构的制备；带有巯基的DNA四面体结构在金电极上的修饰得到顶端连接8‑OHdG适体的巯基的DNA四面体结构的电极；G‑四链体电极的形成；聚苯胺沉积的电化学传感电极；利用电化学方法对产生的聚苯胺的电流信号进行检测从而检测8‑OhdG的活性。本发明极大地提高了8‑OHdG的检测灵敏度。与传统的以8‑OHdG还原峰为信号的电化学检测方法相比，检测限降低2个数量级。本发明无需制备复杂材料以及标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。

主权项

1.基于苯胺沉积的电化学传感电极定量检测8‑OhdG活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）带有巯基的DNA四面体结构的制备；2）带有巯基的DNA四面体结构在金电极上的修饰得到顶端连接8‑OHdG适体的巯基的DNA四面体结构的电极；3）顶端连接8‑OHdG适体的巯基的DNA四面体结构的电极中加入8‑OHdG和辅助因子氯化血红素的条件下8‑OHdG适体的空间构型发生变化，形成具有G‑四链体结构的电极，G‑四链体结构具有辣根过氧化物模拟酶性质；4）G‑四链体电极中加入过氧化氢和苯胺的CH3COOH‑CH3COONa缓冲溶液，G‑四链体作为辣根过氧化物模拟酶催化苯胺形成聚苯胺得到聚苯胺沉积的电化学传感电极；5）利用电化学方法对产生的聚苯胺的电流信号进行检测从而检测8‑OhdG的活性；所述步骤1）的具体步骤如下：将5’端修饰了巯基的A、B、C三条单链和5’端接了8‑羟基脱氧鸟苷适体的D链各0.5~2μL等比例混合在40~50μL TM 缓冲液和0.5~2μL TCEP中，配成终浓度为0.5~2μM的样品，然后将配好的样品放入90~100℃热水浴中持续3~10 min，然后迅速降温到1~5℃，并在1~5℃中持续20~40分钟以上，即可得到带有巯基的DNA四面体结构；所述步骤2）的具体步骤如下：将带有巯基的DNA四面体结构滴加到清洗干净的电极表面，盖上烧杯，常温过夜组装即得。