[发明专利]一种提取三孢酸的方法

摘要

本发明公开了一种提取三孢酸的方法，其特征在于，三孢布拉氏霉正负菌种子液按比例接种到发酵培养基中，发酵生产β‑胡萝卜素，在发酵培养24h后，48h前，加入抗生素；1L发酵液放入离心机，取上清，加稀盐酸调节pH至1.0‑2.0，用分析纯三氯甲烷纯萃取，分层，收集溶液下层‑三氯甲烷相，并向三氯甲烷相内加入等体积的质量分数为3‑4%碳酸氢钠，萃取静置5min，分层集溶液上层‑水相，利用盐酸调节溶液至pH 1.0‑2.0；再加入等体积三氯甲烷萃取静置5min，分层收集下层‑三氯甲烷相，利用旋转蒸发仪，真空浓缩至黄色油状残留物。本发明的提取方法简便、高效，并且提升了三孢酸的纯度。

主权项

一种提取三孢酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种子液培养：将三孢布拉氏霉正负菌分别活化后转接到500mL三角瓶中，种子培养基装液量100mL，培养温度为27℃，摇床转速220rpm，培养时间为48h；（2）发酵培养：将步骤（1）得到的正负菌种子液按比例接种到发酵培养基中，接入500mL三角瓶中，培养基装液量100mL，培养温度为27℃，摇床转速220rpm，发酵生产β‑胡萝卜素，在发酵培养24h后，48h前，加入抗生素；（3）三孢酸的提取：取步骤（2）中1L发酵液放入离心机，5000 rpm、20min离心，取上清，量取500mL，加稀盐酸调节pH至1.0‑2.0，加入500mL分析纯三氯甲烷纯萃取，静置5min，然后溶液分层，收集溶液下层‑三氯甲烷相，并向三氯甲烷相内加入等体积的质量分数为3‑4%碳酸氢钠，萃取静置5min，然后溶液分层；收集溶液上层‑水相，利用盐酸调节溶液至pH 1.0‑ 2.0；再加入等体积三氯甲烷萃取静置5min，分层收集下层‑三氯甲烷相，利用旋转蒸发仪，真空浓缩至黄色油状残留物，利用乙醇定容于5ml棕色容量瓶，并闭光保存留作后续分析。