[发明专利]一种金霉素高产菌株的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了一种金霉素高产菌株的高通量筛选方法，属于代谢工程技术领域。本发明通过5种平板培养基上金色链霉菌生长以及产抗量比较，选择了最佳培养基，为出发菌种提供了保障。本发明通过金霉素与Sm³⁺的显色反应以及金霉素与盐酸共热的比色法两种初筛方法相比较，选择较为简单且准确的显色反应作为初筛方法。验证了硝酸钐显色反应作为初筛手段的重复性和准确度。

主权项

一种金霉素高产菌株的高效筛选方法，其特征在于，所述方法主要包括步骤如下：(1)将待筛选的金色链霉菌菌悬液涂布在固体平板培养基上，待孢子成熟后挑选接种于装有种子培养液的96浅孔板中培养；(2)将96浅孔板中得到的种子液平行转接至装有发酵培养液的48孔板中发酵培养；(3)发酵结束后，离心取菌体，吸取上清液稀释至金霉素浓度为0～20mg/L，然后取稀释液100μL添加到提前加入40μL Tris‑HCl缓冲溶液和60μL Sm(NO)₃溶液的96孔板中，震荡混匀，8min后显色完全，酶标仪测定各浓度的OD₄₀₅值，根据y＝0.0112x‑0.009(其中，x为金霉素浓度浓度(μg/mL)，y为OD₄₀₅nm)计算得到金霉素浓度，进而根据稀释倍数换算得到发酵液的金霉素浓度，即得到产金霉素相对较高的菌株。