[发明专利]一种阿维菌素高产菌株的高效筛选方法

摘要

本发明公开了一种阿维菌素高产菌株的高效筛选方法，属于代谢工程技术领域。本发明首先通过几种不同的阿维链霉菌斜面培养基进行比较，为阿维链霉菌选择了合适的斜面培养基，保证了出发菌株的良好性。对出发菌株阿维链霉菌进行了ARTP诱变等类似诱变处理手段，多孔板培养和酶标仪高通量检测方法结合使用，简化了整个筛选过程，提高了筛选效率。并对酶标仪初筛方法进行验证，通过比较酶标仪测得的孔板OD值与高效液相检测得到的孔板效价相比较，发现两者有较好的相关性，从而证明酶标仪初筛的可行性与准确性。筛选获得了一株阿维菌素的高产量诱变菌株，相比于原始菌，诱变菌株的阿维菌素产量在摇瓶上提高了10％以上，在30L发酵罐上提高了10％以上。

主权项

一种阿维菌素高产菌株的高效筛选方法，其特征在于，所述方法主要包括步骤如下：(1)将待筛选的阿维链霉菌菌悬液涂布在固体平板培养基上，待孢子成熟后挑选接种于装有种子培养液的96浅孔板中培养；(2)将96浅孔板中得到的种子液平行转接至装有发酵培养液的48孔板中发酵培养；(3)发酵结束后，吸取发酵液加入95％乙醇稀释至阿维菌素浓度为0～210μg/mL，于30KHZ、功率40W下超声1min，离心取上清液200μL上清液于96孔酶标板，测定240nm可见光下的吸收值OD240nm，根据y＝0.01781x+0.06292(其中y为OD240nm，x为阿维菌素浓度、单位μg/mL)计算得到阿维菌素浓度，进而根据稀释倍数换算得到发酵液的阿维菌素浓度，即得到产阿维菌素相对较高的菌株。